陈宏月,李兴江

1.锦州医科大学齐齐哈尔医学院附属第一医院研究生培养基地(齐齐哈尔161000)；2.齐齐哈尔医学院附属第一医院(齐齐哈尔161000)

手术是目前临床上用以治疗甲状腺癌的主要方式，手术方式涵盖甲状腺全切除术以及侧叶次全切除术，不同的手术方式临床疗效存在一定的差异[1]。大部分研究学者认为，甲状腺全切除术在降低肿瘤复发率以及改善预后方面效果更为理想，但该治疗术式的风险相对较大，极易并发甲状腺功能减退等并发症[2]。目前，临床上关于甲状腺全切除术应用于甲状腺癌患者中的相关研究并不少见，然而尚未见相关报道对该治疗术式具体作用机制的研究。随着近年来相关研究的不断深入，越来越多的学者发现血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)属于临床上最为常见的一种血管生长因子，VEGF蛋白广泛存在于癌细胞以及血管内皮细胞中，VEGF可通过甲状腺癌细胞合成、分泌，在和血管内皮细胞上的相关受体特异性结合后发挥作用[3]。Fas/FasL系统是近年来日益受到重视的参与细胞调往的信号传导系统，Fas和FasL相结合可向下传递死亡信号，进一步促进细胞凋亡[4]。其中Fas主要是以膜受体形式存在，可通过mRNA水平的不同剪接方式产生缺乏跨膜区的可溶性Fas分子(sFas)，后者则可和胞膜的Fas竞争性结合可溶性Fas配体(sFasL)，进一步发挥调节细胞凋亡的作用[5]。鉴于此，本文通过研究甲状腺全切除术对甲状腺癌患者血清VEGF、sFas、sFasL mRNA表达的影响，旨在明确甲状腺全切除术应用于甲状腺癌患者中的具体作用机制，现报告如下。

资料和方法

1 一般资料 纳入从2017年2月至2019年2月，于我院拟行甲状腺全切除术治疗的甲状腺癌患者40例作为研究对象。其中包括男性患者17例，女性患者23例，年龄39～69岁，平均年龄(54.02±3.42)岁；病理类型：乳头状癌32例，髓样癌5例，滤泡状癌3例；受教育程度：初中及初中以下16例，高中及高中以上24例；婚姻状况：已婚33例，未婚或离婚7例；病变情况：单侧叶33例，双侧叶4例，峡部3例；有淋巴结转移27例，无淋巴结转移13例。病例纳入标准：①所有患者均经手术病理组织活检确诊为甲状腺癌；②均行甲状腺全切除术治疗；③年龄均在18周岁以上；④入院前均未接受任何相关抗肿瘤治疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②心、肝、肾、肺等重要脏器发生病变者；③伴有严重感染性疾病、全身免疫系统疾病者；④意识障碍或伴有精神疾病者；⑤正接受其他研究者。纳入对象均在知情同意书上签字，并获批于医院伦理委员会。

2 研究方法

2.1 标本采集：分别于术前1 d以及术后1 d采集所有受试者静脉血10 ml，将其分别装于两个EP管内，一管用作VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平检测，另一管用作血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平检测。

2.2 VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平检测：检测方式为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法，具体操作务必按照相关试剂盒说明书进行。首先完成电泳胶的制备，随后遵循操作要求将制备完善的电泳胶置入电泳槽，根据RT-PCR法反转录获得cDNA，并进行总RNA的提取。将获取的PCR产物于6倍缓冲液混匀、电泳。PCR反应参数如下：95℃预变形5 min，95 ℃30 s，55 ℃退火45 s，72℃延伸反应45 s，重复35个循环。72℃ 7 min，随后实施PCR扩增，扩增产物的检测借助1.5%琼脂糖电泳完成。维持电泳电压为100 V，凝胶成像并照相，最后进行VEGF、sFas、sFasL mRNA相对表达量的计算。

2.3 血清IL-6、IL-8、TNF-α表达水平检测：检测方式为酶联免疫吸附法，首先以6 cm为离心半径，通过3000 r/min离心10 min，分离血清保存在-80℃冰箱中备用。具体操作务必遵循相关试剂盒说明书进行，相关试剂盒均购自青岛腾龙微波科技有限公司。

3 观察指标 比较手术前后患者血液样本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平以及血清IL-6、IL-8、TNF-α水平。

结 果

1 手术前后患者血液样本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平对比 手术后患者血液样本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平分别显著低于手术前的水平(均P<0.05)，见表1。

表1 手术前后患者血液样本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平对比

2 手术前后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平对比 手术后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平分别显著低于手术前的水平(均P<0.05)，见表2。

表2 手术前后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平对比

3 甲状腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平与血清IL-6、IL-8、TNF-α水平相关性分析 经Pearson相关性分析可得：甲状腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平与血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均呈正相关(均P<0.05)，见表3。

表3 甲状腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平与血清IL-6、IL-8、TNF-α水平相关性分析

讨 论

甲状腺癌属于临床上较为常见的恶性肿瘤之一，且随着人们生活方式的不断改变以及生活环境的逐渐恶化，甲状腺癌的发病率正呈逐年升高趋势[6-7]。外科手术是迄今为止国内外所公认的治疗甲状腺癌最有效手段之一，且甲状腺全切除术的效果最为明显。然而，关于手术对甲状腺癌的作用机制尚未完全明确，已成为广大医务人员共同关注的热点。Fas是近年来所发现的细胞凋亡信号受体，广泛存在于活化的T、B细胞以及单核细胞表面，而在正常组织以及肿瘤细胞上均有广泛表达，当Fas和其特异性配体FasL相结合后，可转导凋亡信号，诱导表达Fas细胞的凋亡[8-10]。正常状态下，当免疫活性细胞表达的FasL和肿瘤细胞上的Fas结合后，可杀伤肿瘤细胞执行肿瘤免疫功能。而表达FasL的肿瘤细胞不但可逃避免疫系统的Fas途径杀伤，同时可能引起表达Fas免疫活性细胞的凋亡，杀伤免疫细胞[11-13]。由此可见，Fas/FasL可能在甲状腺癌的发生、发展过程中扮演着凋亡调节基因的角色。此外，临床上已有大量研究报道证实[14]，慢性炎症反应介导了多种恶性肿瘤的发生、发展，甚至在肿瘤的转移过程中起着至关重要的作用，IL-6、IL-8、TNF-α均是目前临床上应用较为广泛的炎症反应标志物，可在一定程度上反映机体炎症反应程度，因此可能和甲状腺癌的发生、发展存在密切相关。

目前临床上已有大量的研究报道证实凋亡参与了肿瘤的发生、发展过程，而凋亡主要是由一系列外在以及内在的信号所调节，Fas/FasL系统便是其中一条极其重要的凋亡诱导途径。sFas最主要的来源为免疫细胞，尤其是淋巴细胞以及自然杀伤细胞，而肿瘤细胞亦是sFas的重要来源。国内外已有不少研究结果证实，多种肿瘤细胞均表达FasL，表明了肿瘤细胞可能通过sFas、sFasL的高表达，继而起到逃避免疫监视的作用。而本文结果发现：手术后患者血液样本中VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平均显著低于手术前(均P<0.05)。这与李亚南等[15]的研究结果相符，其在报道中指出，甲状腺全切除术可显著下调大鼠甲状腺癌组织VEGF、sFas、sFasL mRNA表达水平。这充分提示了甲状腺全切除术应用于甲状腺癌患者的治疗中，可有效抑制VEGF、sFas以及sFasL的产生，进一步达到治疗疾病的目的。此外，本文还显示，手术后患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于手术前(均P<0.05)。这提示了甲状腺全切除术的应用可在一定程度上降低甲状腺癌患者血清IL-6、IL-8、TNF-α水平。分析原因，笔者认为肿瘤患者体内的单核巨噬细胞以及中性粒细胞杀伤作用显著增强，加之肿瘤细胞逐渐增值以及转移过程中肿瘤细胞自分泌均会促进上述各项指标的合成、分泌。而手术治疗通过切除病灶组织，继而从根本上阻止了上述两种途径对IL-6、IL-8、TNF-α表达的上调。与此同时，IL-6、IL-8、TNF-α表达水平的高低可在一定程度上反映机体的免疫功能，即随着机体免疫功能的不断增强，上述各项指标表达水平随之下降。另外，本文进一步经Pearson相关性分析可得：甲状腺癌患者血液中VEGF、sFas、sFasL mRNA水平与血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均呈正相关。这再次证实了VEGF、sFas、sFasL mRNA的表达可能在一定程度上影响IL-6、IL-8、TNF-α表达，亦或是受IL-6、IL-8、TNF-α所影响，两者可能在甲状腺癌的发生、发展过程中起着协同的作用。关于其具体作用机制仍需进一步深入研究，这也为今后的研究提供了方向。

综上所述，甲状腺全切除术可实现对甲状腺癌组织的切除，进一步抑制甲状腺癌的生长、转移，而其主要作用机制可能和下调VEGF、sFas、sFasL以及IL-6、IL-8、TNF-α的表达有关，值得临床重点关注。