唐春艳， 贺 英， 周杨杨， 程 强， 羿国娟， 鲁 兰

(成都大学 四川抗菌素工业研究所， 四川 成都 610052)

0 引 言

抗生素的耐药性问题是当今受到普遍关注的热点问题，作为耐药菌之一的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，Pa)是临床常见的致病菌，其耐药机制与分泌的毒力因子有关，包括生物被膜生成，绿脓菌素及弹性蛋白酶分泌等，而这些毒力因子受细菌密度感应(Quorum sensing，QS)系统调控[1-3].有研究发现，Pa中至少存在2种以上QS系统，分别是以C4-HSL、3-oxo-C12-HSL为信号分子的高丝氨酸内酯系统和以喹诺酮为信号分子的PQS系统[4]，其中又以高丝氨酸内酯系统最具代表性.在该系统中，C4-HSL、3-oxo-C12-HSL分别参与上游主控基因Las、Rhl等的调控[5-7]，其与细菌耐药性和致病性高度相关，对其进行浓度测定具有重要意义.对此，本研究通过建立一种较为完整的液—质联用的方法，用于Pa培养液中C4-HSL、3-oxo-C12-HSL的浓度测定，并将其应用于清热解毒中药金银花水煎液对Pa的抗菌作用机制的研究中.

1 材料与仪器

1.1 材 料

实验所用材料包括：C4-HSL标准品(批号，10007898，规格为10 mg)，Cayman公司；3-oxo-C12-HSL标准品(批号，09139，规格为10 mg)，Sigma公司；酮洛芬(含量为99.6%)、铜绿假单胞菌(临床致病菌株15-23)，四川抗菌素工业研究所；金银花(忍冬科植物忍冬的干燥花蕾)，成都同仁堂药店，经本实验室测定，其最低抑菌浓度(MIC)为100 mg/mL；胰酪大豆琼脂培养基(TSA，7053894)，美国BD公司；胰蛋白胨(01-002)，北京奥博星生物技术有限责任公司；酵母浸出粉，成都科龙化工试剂厂；生理盐水，四川科伦药业股份有限公司；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯.

1.2 仪 器

实验所用仪器包括：Agilent-6410B型质谱……