王厚臣 丁元振 滕程光 王黎明 隋秀奇

（1 烟台现代果业科学研究院，烟台264003；2 山东省诸城市桃林镇农业综合服务中心，诸城262222）

目前世界上共发现30 余种可侵染苹果的病毒， 已经明确可给苹果造成危害的有16 种。一旦感染病毒病，苹果树全身带有病毒，终生不愈，并且具有传染性。病毒不但破坏树体的正常生理机能，还造成果实产量和品质下降，甚至引起果树死亡， 严重影响苹果优质高产和经济效益的提高。

1 苹果病毒病的种类和传播途径

苹果病毒病根据危害特点可分显性病毒病和潜隐性病毒病。 显性病毒病有花叶病、绿皱果病、锈果病等，潜隐性病毒病有褪绿叶斑病、苹果茎沟病、苹果茎痘病等。

病毒传播途径有：通过昆虫或螨类传播，通过带毒植株的汁液传播， 果树根系接触直接传播，通过嫁接传播和果园使用工具传播等。

2 双脱毒苗木的生产过程

目前国际上尚无良药、良法防控病毒病，最简单有效的办法是使用脱毒苗木。 采用植物组织培养技术，对‘烟富8’苹果种条和砧木进行病毒脱除，再经过培养繁育获得双脱毒苗木。双脱毒的‘烟富8’苹果苗木抗逆性强，成花容易，结果早，果品质量高，丰产潜力大。

2.1 取样与消毒

首先将砧木（如M9T337、M26、八棱海棠）和‘烟富8’接穗的枝条进行消毒处理，放到有营养液的培养瓶内让其生长发芽， 发芽后采顶芽进行消毒接种。

2.2 剥取茎尖与接种

在超净工作台上， 用解剖刀仔细剥离幼叶至裸露的生长点，用刀尖切下带1～2 个叶原基的生长点，将切下的茎尖转移至培养基上，培养成无菌瓶苗。

2.3 进行高温钝化

将无菌瓶苗放在38～40 ℃的智能人工气候箱里生长30 d 左右，使苹果苗内含有的各种病毒在高温下逐渐钝化，失去活性。

2.4 进行二次茎尖剥离

经过高温钝化的无菌瓶苗已经使病毒失去侵染能力， 对存活的无菌瓶苗进行二次茎尖剥离处理，处理及消毒方法同第1 次，再次剥离，得到0.2～1.0 mm 长的茎尖，可达到无毒状态。

2.5 无毒茎尖进行接种快速繁殖

经过脱毒的茎尖在无菌接种室内的超净工作台上，接种到快繁培养基内进行快速繁殖。扩繁瓶苗培养周期为1 个月，1 个月后再进行分瓶接种。这种繁殖方式是在无菌、密闭的情况下进行，不用担心外界病毒传染源的感染。

2.6 进行生根培养

无毒瓶苗繁殖到一定数量后，再把独立的单株接种到生根培养基上进行生根培养。 生根瓶苗在无菌培养室内培养15～18 d，根生长到1 cm 左右，完成生根培养。

2.7 温室驯化成穴盘苗

脱毒苗再转移到温室进行驯化锻炼， 瓶苗驯化结束后，将瓶苗移栽到穴盘内，经过一定时间的生长发育，完全适应自然环境。

2.8培养原始1代脱毒砧木、品种接穗，建采穗圃和培育成苗

已适应自然环境的‘烟富8’和M9T337 穴盘苗，直接定植到防虫网室中，建立原始1 代无毒苗木采穗圃。

经过温室驯化锻炼的八棱海棠、M9T337等砧木穴盘苗，直接移栽到苗圃中。在苗圃生长50 d 左右，就可以取防虫网室中的脱毒‘烟富8’接穗进行嫁接（嫁接工具要消毒），这样嫁接成活的苗子实现了砧木、接穗双脱毒的目的。经过精心培养，秋天落叶后出圃。

3 双脱毒苗木果园管理事项

利用双脱毒苗木建设的果园， 在整个管理期，要注意修剪等工具专用，使用前工具用酒精浸泡或采用烧烤等方法彻底消毒， 严禁与非脱毒苗木串用。因品种改良需要高接换头的，应选用无病毒接穗， 切不可盲目嫁接来路不明的接穗。同时，注意一次性选好品种，避免多次高接，减少传染。