付满玲1 周 科2 刘珉甬3 李亚玲4

1.西南医科大学护理器械研发实验室，四川 泸州 646000； 2.四川众鼎中药发展有限公司，四川 泸州 646000； 3.泸州岷宏科技有限公司，四川 泸州 646000； 4.西南医科大学附属医院药学部，四川 泸州 646000

栀子是茜草科(Rubiaceae)植物栀子(GardeniajasminoidesEllis)的干燥成熟果实，具有护肝、利胆、降压等多种药理作用，是我国传统中药，在我国四川等地广泛分布。栀子黄色素是从栀子中提取的一种优良水溶性天然色素，属类胡萝卜素，其在栀子成熟果实的含量为3%～8%[1]。栀子黄色素主要成分是藏花素，其着色自然；具有具有清热去火、利胆护肝、降低胆固醇等功效[2]；在人体内可以转化为维生素A，因此它是一种集着色、营养和保健等功能为一体的天然色素，在医药和食品行业中具有广泛应用[3]。栀子黄色素粗品在保藏或使用过程中容易发生褪色或绿变现象，其主要原因是色素中存在大量的栀子苷，其在葡萄糖酶或蛋白酶的作用下与氨基酸反应生成栀子蓝色素，从而导致栀子黄色素绿变现象的发生，由此限制了栀子黄色素产品的广泛应用[4]。因此，研究栀子黄色素的提取和纯化工艺对于提高栀子黄色素的品质，以及实现栀子黄色素的高效优质生产具有重要意义。

1 材料

1.1 药材 栀子由四川众鼎中药发展有限公司提供，经西南医科大学税丕先教授鉴定为GardeniajasminoidesEllis的成熟果实。

1.2 试剂 HPD-100A大孔树脂：安徽三星树脂科技有限公司。

1.3 仪器 RE52CS-1旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；SP-1901紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司。

2 方法与结果

2.1 栀子黄色素提取工艺优化

2.1.1 前处理 栀子经剔除杂物、次果，于45 ℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，密封避光保存备用。

2.1.2 栀子黄色素的提取工艺

2.1.2.1 乙醇浓度 精密称取5份栀子果粗粉，每份1 g。分别加入15%、35%、55%、75%、95%乙醇10 mL加热回流提取1 h，补足减失的重量，过滤，旋干，转移到100 mL容量瓶中并以纯水溶解和定容，440 nm 处测吸光度。结果以15%、35%、55%、75%、95%乙醇分别加热回流提取时，以样品吸光度为指标，5份栀子果粗粉在440nm处的吸光度分别为0.22、0.35、0.50、0.44和0.32，因此选取第3份样品，即55%的乙醇溶液作为提取溶剂。

2.1.2.2 料液比 精密称取5份栀子果粗粉，每份1 g。分别以料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12和1:14(m∶v)加入55% 的乙醇溶液，回流提取1 h，补足减失的重量，过滤，旋干，转移到100 mL容量瓶中并以纯水溶解和定容，440 nm 处测吸光度。结果以料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12和1∶14分别提取时，藏红花素在440 nm处的吸光度分别为0.15、0.36、0.52、0.45和0.36，因此选取料液比为1∶10提取栀子黄色素。

2.1.2.3 提取时间 精密称取5份栀子果粗粉，每份1 g。均以料液比1:10加入55% 的乙醇溶液，分别回流提取0.5、1、1.5、2、2.5h，补足减失的重量，过滤，旋干，转移到100 mL容量瓶中并以纯水溶解和定容，440 nm处测吸光度。结果提取时间分别为0.5、1、1.5、2、2.5 h时，藏红花素在440 nm处的吸光度分别为0.1、0.51、0.62、0.50和0.45，因此选取1.5 h提取栀子黄色素。

2.1.2.4 提取次数的考察 精密称取3份栀子果粗粉，每份1 g。以55%乙醇作溶剂，料液比1∶10，分别提取1、2、3次，每次 1.5 h，补足减失的重量，过滤，合并滤液，旋干，转移到100 mL容量瓶中并以纯水溶解和定容，440 nm处测吸光度。结果分别提取1、2、3次时，藏红花素在440 nm处的吸光度分别为0.38、0.75和0.64，因此选取提取2次提取栀子黄色素。

2.1.3 栀子黄色素的最佳提取工艺 根据2.1.2项下试验结果，选择最优条件下提取方法，故本试验选用55%乙醇，料液比1∶10，加热回流提取2次，每次1.5 h，作为栀子黄色素最佳提取工艺。

2.1.4 最佳提取工艺验证 精密称取5份栀子果粗粉，每份1 g，分别加入55%乙醇10 mL回流提取2次，每次1.5 h，补足减失的重量，过滤，合并滤液，旋干，转移到100 mL容量瓶中并以纯水溶解和定容，于440 nm处测吸光度。结果5次重复实验的平均吸光度0.76，相对标准偏差RSD为1.01%，表明该提取工艺合理可行。

2.2 栀子黄色素精制品与色价测定

2.2.1 栀子黄色素的提取 精密称取10 g栀子果粗粉，加入55%乙醇100 mL加热回流提取2次，每次1.5 h，补足减失的重量，过滤，合并滤液，旋干,干燥，即得栀子黄色素粗品。将粗品溶于200 mL水中，湿法上柱于已经过预处理的HPD-100A大孔树脂柱，先以水洗，再分别以20%和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，干燥，即得栀子黄色素精制品。

2.2.2 栀子黄色素色价和OD值的测定

栀子黄色素OD值为238 nm 和440 nm 处吸光度的比值。

OD=A238 nm/A440 nm

栀子黄色素粗品和精制品均按国标GB7912-2010 法测定色价和OD值。测得的栀子黄色素粗品的色价为78.2，OD值为1.3；栀子黄色素精制品的色价为360，OD值为0.25。因此，利用HPD-100A大孔树脂柱色谱法可以大大地提高栀子黄色素的品质。

3 讨论

栀子主要含藏花素和栀子苷，藏花素是栀子黄色素的主要成分，而栀子苷的存在常会引起栀子黄色素的绿变。栀子苷和藏花素分别在 238 nm和440 nm 处有最大吸收峰，栀子苷的最大吸光值A238 nm与藏花素的最大吸光值 A440 nm 比值即OD比值小于0.4时，可防止栀子黄色素的绿变[5]。因此，优化栀子黄色素提取工艺，提高色素提取效率，减少其中栀子苷的含量，从而提高色素的纯度，对于提高栀子黄色素的品质具有重要意义。

本研究考察了栀子加热回流提取时乙醇浓度、料液比、提取时间和提取次数对栀子黄色素提取率的影响，结果最佳提取条件为:乙醇浓度55%、料液比1∶10、提取时间1.5 h 、提取次数2次。初步提取后，利用HPD-100A大孔树脂柱色谱法进行精制，依次采用水、20%乙醇和75%乙醇洗脱，其中用水洗可除掉氨基酸、多肽、无机盐、多糖等水溶性杂质；采用20%乙醇溶液洗脱可除掉栀子苷；最后用75% 乙醇洗脱即得栀子黄色素，经减压回收溶剂，并干燥即得栀子黄色素精制品。

大孔树脂吸附精制栀子黄色素具有吸附速度快、吸附容量大、选择性好、简单高效等优点，适合制备高色价的栀子黄色素。有研究表明，HPD-100A型大孔树脂适宜纯化栀子黄色素，精制后得到的产品质量较高[4]。本试验利用HPD-100A大孔树脂柱色谱法精制栀子黄色素，精制后的栀子黄色素的色价由原来的78.2 提高到360，OD值由原来的1.3降到0.25， HPD-100A大孔树脂柱色谱法可以大大地提高栀子黄色素的品质。