何明霞，许欣景，杨天伟，刘 静，高 锋，方艺伟，王文兵，张春霞，曹 旸，王 云

（云南省热带作物科学研究所，云南 景洪 666100）

暗褐网柄牛肝菌 [Phlebopus portentosus(Berk.&Broome)Boedijn]，俗名黑牛肝菌，隶属于牛肝菌目（Boletales） 小牛肝菌科（Boletinellaceae），主要分布于我国云南、四川、广西和海南等地[1-2]。国外分布于泰国和斯里兰卡等地[3-8]。其子实体品质鲜嫩，味道鲜美，肉质细腻，营养价值丰富，是云南南部及泰国东北部最受群众喜爱的名贵食用菌之一[9-12]。

云南省热带作物科学研究所对暗褐网柄牛肝菌的生物学特性，及其菇房人工栽培和田间仿生栽培进行了多年的研究，获得暗褐网柄牛肝菌菇房人工栽培和适宜季节的田间仿生栽培的整套技术[13-16]。暗褐网柄牛肝菌成为了食用牛肝菌家族中唯一可以进行人工栽培的种类。前期研究结果显示，菇房人工栽培暗褐网柄牛肝菌的关键技术环节是覆土，即发菌完成后，覆土后才可以出菇。覆土出菇的机制目前尚不完全清楚，但已知的是，覆土材料中的微生物对暗褐网柄牛肝菌原基的形成和子实体的成熟起到了重要作用[17]。本研究中，拟研究覆土材料的选择、覆土材料的制备和覆土方法等对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长、出菇及产量的影响，筛选出能促使菌丝生长快、出菇早、子实体单菇产量高的覆土材料。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试菌株：ph15013菌株，由采自云南西双版纳凤凰木 [Delonix regia(Boj.)Raf.] 树下的野生子实体分离得到。

供试覆土材料：堆制发酵土、凤凰木林下土壤、菜园土和泥炭。

供试菌袋：高密度聚丙烯塑料菌袋，规格17.00 cm×35.00 cm×0.07 cm。

栽培基质：橡胶木木屑63%、红土粉11%、谷粒 25%、碳酸钙 1.0%、MgSO40.1%、KH2PO40.1%。

覆土材料含水量用浙江托普仪器有限公司TZS-Ⅱ水份测定仪测定。

1.2 方法

1.2.1 栽培菌袋的制备

覆土研究使用的菌袋制备参照文献[18]。灭菌条件为 0.15 MPa，121℃灭菌 120 min。

1.2.2 覆土材料的制备

堆制发酵土（a）：在红土中加入一定量的干牛粪，淋水拌匀，堆成下面大、上面小的土堆，盖塑料布，发酵6个月，3个月翻堆1次；凤凰木林下土壤（b）：挖取凤凰木林下地表20 cm以下的土壤；菜园土（c）：挖取菜园地表20 cm以下的土壤。待菌丝长满菌袋后，将3种土壤粉碎，过筛后分别与泥炭按1∶1混合。

3种土壤为3个覆土处理，每个处理覆土40袋，共计120袋。

1.2.3 覆土层含水量处理

堆制发酵土与泥炭按1∶1比例混合后，制成含水量分别为 40.0% （处理 a）、45.0% （处理 b）、50.0%（处理c） 和65.0%（处理 d） 的4种不同含水量的覆土材料，即4个处理，每个处理覆土30袋，共计120袋。

1.2.4 覆土材料 pH 处理

堆制发酵土与泥炭按1∶1比例混合后，用柠檬酸及石灰将其pH分别调为4（处理a）、b∶5（处理b）、6（处理c） 和7（处理d），即4个处理，每个处理覆土30袋，共计120袋。

1.2.5 覆土厚度处理

堆制发酵土与泥炭按1∶1比例混合后，对培养好的菌袋进行覆土，覆土层厚度设4个处理，分别是2 cm（处理a）、4 cm（处理 b）、6 cm（处理 c）和8 cm（处理d），每个处理覆土30个菌袋，共计120袋。

1.2.6 培养方法

覆土后菌袋放于培菌室内（湿度75.0%、光照100 lx）培养，当菌丝长满覆土层后移入出菇室（湿度85.0%、光照300 lx） 培养出菇。

1.2.7 正交试验

选用L9（34）正交表，以覆土材料配方（因素A）、覆土材料含水量（因素B）、覆土材料pH（因素C）和覆土层厚度（因素D）为直接因素进行正交试验。水平因素表见表1。共设9个处理，筛选出各因素之间的最佳组合。

表1 L9（34）正交试验因素与水平Tab.1 Factors and levels of L9（34）orthogonal test

1.3 项目测定

覆土第10天，测量覆土层菌丝生长量，记录出菇天数，称量单个菌袋子实体重量。

1.4 数据分析

用DPSv 6.05统计软件Duncan新复极差法进行分析。

2 结果与分析

2.1 覆土材料配方对菌丝生长及子实体生长的影响

不同覆土材料配方对菌丝生长及子实体生长的影响见表2。

由表2可知，3种不同覆土材料对菌丝生长量的影响无显著差异。不同覆土材料对子实体生长和产量的影响差异显著。采用处理a比处理b和处理c出菇要早，仅需9.00 d，而且子实体平均单菇重也最重，为107.36 g。因此，栽培暗褐网柄牛肝菌的最佳覆土材料为处理a（堆制发酵土）。同时，堆制发酵土不仅制作省工、简便，而且发酵后土壤的孔隙度和持水性增加，饱和含水量加大，一些可利用的营养物质和有机质含量也有所增多，有利于暗褐网柄牛肝菌和其他有益微生物生长发育，是一种具有良好覆土特性的覆土材料。

表2 不同覆土材料配方对菌丝生长及子实体生长的影响Tab.2 Effects of different casing materials on mycelial and fruiting body growth

2.2 覆土材料含水量对菌丝生长及子实体生长影响

不同覆土材料含水量对菌丝生长及子实体生长的影响见表3。

表3 覆土材料不同含水量对菌丝生长及子实体生长的影响Tab.3 Effects of different water content of casing materials on mycelial and fruiting body growth

由表3可知，处理c中菌丝生长最快，覆土后第10天菌丝生长量为4.0 cm，而且出菇也最快，8.67 d开始出菇，与处理a和处理d有显著差异；其子实体平均单菇重也最重，为124.71 g，与其他3个处理有极显著差异。因此，菇房栽培暗褐网柄牛肝菌，覆土材料含水量为50%，菌丝生长快，出菇早，子实体单菇产量高。

2.3 覆土材料pH对菌丝生长及子实体生长的影响

不同覆土材料不同pH对菌丝生长及子实体生长的影响见表4。

表4 覆土材料不同pH对菌丝生长及子实体生长的影响Tab.4 Effects of different pH of casing materials on mycelial and fruiting body growth

由表4可知，在处理b中菌丝生长最快，覆土10 d后菌丝生长量4.85 cm；产出的子实体单菇重也最重，为120.60 g，与其他3个处理有极显著差异；出菇早，11 d开始出菇，与处理c和处理d相比差异极显著。因此，覆土材料pH为5时，栽培暗褐网柄牛肝菌效果最好。这一试验结果正好与调查的暗褐网柄牛肝菌的生态学特性结果相一致，在自然界中，暗褐网柄牛肝菌生长于偏酸性的土壤。

2.4 覆土材料厚度对菌丝生长及子实体生长的影响

不同覆土材料厚度对菌丝生长及子实体生长的影响见表5。

表5 不同覆土层厚度对菌丝生长及子实体生长的影响Tab.5 Effects of different soil layer thickness on mycelial and fruiting body growth

注：表中大写、小写字母分别表示在1%、5%水平差异显著。Note:The uppercase and lowercase letters in the table indicate significant differences at the level of 1%and 5%,respectively.

由表5可知，在处理c中菌丝生长最快，覆土10 d，菌丝生长量为4.98 cm，与处理a相比差异显著；且出菇最早，9.50 d开始出菇；子实体单菇重最重，达126.50 g，与处理d和处理a差异显著。因此，覆土层太厚或太薄均不利于菌丝及子实体的生长，覆土层的厚度为4 cm～6 cm时，暗褐网柄牛肝菌栽培效果较好。

2.5 正交试验

不同覆土材料配方、覆土材料含水量、覆土材料pH及覆土层厚度处理组合对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长、出菇天数及子单菇重影响结果见表6。

表6 不同处理的菌丝生长量、出菇天数、单菇重Tab.6 Mycelial growth,fruiting days,single fruiting body weight under different treatments

子实体单菇重是评价栽培暗褐网柄牛肝菌的最重要指标。由表6可知，覆土材料配方对暗褐网柄牛肝菌菌丝生长、出菇天数及子实体单菇重的影响达到极显著水平，说明覆土材料配方是影响菌丝生长及子实体生长的主要因素。

对各处理的菌丝生长量、出菇天数和子实体单菇重进行方差分析和多重比较结果见表7。

表7可知，对子实体单菇重的影响因素顺序依次为覆土材料＞覆土材料厚度＞覆土材料含水量＞覆土材料pH。表明覆土材料是影响牛肝菌子实体单菇重的主要因素，覆土材料厚度、覆土层含水量及覆土材料pH为次要因素。综上，4个因素的最佳组合为A1B2C2D1。

表7 不同因素水平对菌丝生长、出菇天数、子实体单菇重的影响Tab.7 Effects of different factors on mycelial growth,fruiting days,single fruiting body weight

3 结论

覆土是暗褐网柄牛肝菌栽培的重要环节，发现出菇与覆土存在密切关系，不覆土则不出菇；通过研究菜园土、果园土和堆制土的理化性质及其对暗褐网柄牛肝菌出菇的影响，发现菜园土的全碳、全磷、有效磷等含量显著高于果园土和堆制土，用菜园土覆土出菇的暗褐网柄牛肝菌平均单菇重最高[18]。覆土与微生物的存在是瓶栽条件下暗褐网柄牛肝菌菌株形成原基和成熟子实体的重要条件[19]。覆土层的空隙度也是影响食用菌生长的重要理化因素之一，覆土空隙度与食用菌产量正相关[20]。泥碳中含有大量微生物，且泥炭因其饱和含水量大，持水性好，孔隙度大、结构稳定的特性，十分有利于食用菌菌丝与子实体生长发育。

在前期的单因子试验中发现，发酵土是人工栽培暗褐网柄牛肝菌的最佳覆土材料，50%发酵土和50%泥炭作为覆土材料，含水量50%、pH 5、覆土层厚度6 cm，菌丝生长快，出菇早，子实体平均单菇更重。

通过本次正交试验，结果表明不同覆土材料对菌丝生长、出菇天数及子实体单菇重的直接影响最大，覆土材料厚度、覆土层含水量及覆土材料pH为次要因素。50%堆制发酵土和50%泥炭是栽培暗褐网柄牛肝菌的最佳覆土材料，覆土层厚度4 cm～6 cm、覆土材料含水量45%～50%和pH 5为最佳组合。