夏金兰　曾庆宏　万红梅　严新美　刘大勇　王菁　胡小武

[摘要]目的 探討冠心病患者血脂水平检测及载脂蛋白E（ApoE）基因多态性分析的临床意义。方法 选取本院2016年10月～2018年3月收治的90例冠心病患者作为实验组，另选取同期住院的90例非冠心病患者作为对照组。采用生物化学的方法分别对经冠状动脉造影确诊的90例实验组患者和90例对照组患者进行空腹血脂水平检测，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析方法对ApoE基因进行多态性分析。结果 实验组的总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白B及脂蛋白a水平均高于对照组（P<0.05），载脂蛋白A1水平低于对照组（P<0.05）。实验组ApoE等位基因ε2基因型频率明显低于对照组（P<0.05）。结论 ApoE基因多态性特征会明显影响人群中个体的血浆脂质水平，增加人群中个体发生冠心病的危险，为有效预防冠心病提供有力依据。

[关键词]载脂蛋白E;基因多态性;危险因子;冠心病

[中图分类号] R541.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）9（a）-0039-03

Clinical significance of blood lipid level detection and apolipoprotein E gene polymorphism analysis in patients with coronary heart disease

XIA Jin-lan   ZENG Qing-hong   WAN Hong-mei   YAN Xin-mei   LIU Da-yong   WANG Jing   HU Xiao-wu

Department of Cardiology， Xinyu People′s Hospital， Jiangxi Province， Xinyu   338000， China

[Abstract] Objective To explore the clinical significance of blood lipid level detection and apolipoprotein E gene polymorphism analysis in patients with coronary heart disease. Methods All of 90 patients with coronary heart disease admitted to our hospital from October 2016 to March 2018 were selected as the experimental group， and 90 patients with non-coronary heart disease admitted to the same period were selected as the control group. The fasting lipid levels were detected by biochemical methods in 90 experimental patients who were diagnosed by coronary angiography and 90 control patients. Polymorphism analysis of ApoE gene was performed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism （PCR-RFLP）. Results The levels of total cholesterol， triglyceride， low density lipoprotein-cholesterol （LDL-C）， apolipoprotein B and lipoprotein a in the experimental group were higher than those in control group （P<0.05）， while the levels of apolipoprotein A1 was lower than that in the control group （P<0.05）. The frequency of ApoE allele ε2 genotype in the experimental group was significantly lower than that in the control group （P<0.05）. Conclusion ApoE gene polymorphism can significantly affect the plasmalipid level of individuals in the population， increase the risk of coronary heart disease， and provide a strong basis for effective prevention of coronary heart disease.

[Key words] Apolipoprotein E; Gene polymorphism; Risk factors; Coronary heart disease

冠心病是由冠状动脉病变引起的心脏疾病，临床最常见的病变类型是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化，引起管腔狭窄甚至闭塞[1]。冠状动脉在正常情况下有很强的代偿能力，可随心脏活动量的变化调整供血。冠脉管腔内脂质堆积、冠脉畸形、炎症、痉挛等均可导致冠脉狭窄，当冠脉狭窄程度超过50%～75%时，机体在激动或劳累时就会出现以胸痛为主要表现的临床症状。随着人们对医学的深入研究，除了吸烟、高血压、高血脂、肥胖、过量饮酒等众所周知的危险因子外，新的危险因子如某些微量元素如锌、硒缺乏、胰岛素抵抗、同型半胱氨酸增高、促凝血因子水平升高也逐渐受到人们关注。人们逐渐开始从微观角度探索冠心病的危险因素，从而全面认识冠心病。研究发现[2]，载脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）的多态性与高血脂症、主动脉狭窄的发生密切相关，人们试图从基因水平了解冠心病，进而做到有效预防和筛查[3]。为此，本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）分析方法检测人群中ApoE的多态性并探讨其与冠心病之间的关系，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取本院2016年10月～2018年3月收住院的冠心病患者90例。纳入标准：①入院经冠脉造影检查确诊的冠心病患者;②患者既往无阿片类药物使用史;③患者知情本研究内容并签署知情同意书。排除标准：①合并严重脑血管疾病以及有肝、肾、内分泌等影响脂质代谢疾病者;②严重呼吸功能不全以及肿瘤转移的患者。对照组为同期住院的90例非冠心病患者，纳入标准：①经冠脉造影检查未见明显狭窄者;②无高血压、高血脂等影响血脂水平的疾病者;③既往无阿片类药物使用史者;④患者知情本研究内容并签署知情同意书。排除标准同上。本研究经过医院医学伦理委员会审核批准。将90例冠心病患者作为实验组，另选取同期住院的90例非冠心病患者作为对照组。其中，实验组：男58例，女32例;平均年龄（64.32±3.02）岁;BMI（22.15±3.27）kg/m2。对照组：男56例，女34例;平均年龄（65.35±2.89）岁;BMI（22.36±3.51）kg/m2。两组患者的性别组成、年龄一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1 ApoE基因多态性分析  常规无菌采集两组空腹静脉血4 ml放入含有乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）的样本管中，并于2 h内在4℃下离心分离血浆和细胞成分，转速1600 r/min，离心后至于-50℃下保存待测。应用PCR技术限制片长多态性分析的方法，对ApoE基因进行扩增，扩增引物序列：P1为5′-ACAGAATTCGCCGGGGGGCGTCGTAC-3′，P2为5′-TTAGCTTGCAGCGGCTGTACCACCG-3′。

1.2.2血脂检测  血脂检测按照常规生物化学检测方法进行。

1.3观察指标

①两组患者的总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、載脂蛋白B、脂蛋白a及载脂蛋白A1水平;②两组患者的ApoE等位基因的频率分布。

1.4统计学方法

数据采用SPSS 21.0专业统计学分析软件进行分析，计数资料比较采用χ2检验;符合正态分布的计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;不符合正态分布者，转换为正态分布后进行统计学分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组患者血脂水平的比较

实验组的总胆固醇、三酰甘油、LDL-C、载脂蛋白B及脂蛋白a水平均高于对照组，载脂蛋白A1水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

2.2两组患者ApoE等位基因频率分布的比较

酶切后的ApoE基因产生E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4和E4/4六种基因型，分别由等位基因ε2、ε3、ε4决定。实验组的ApoE等位基因ε2频率明显低于对照组（P<0.05）（表2）。

3讨论

据WHO统计，冠心病仍是目前全球最常见的死亡病因，致死数已超过所有肿瘤死亡人数的总和。近30年来，冠心病的发病率在我国逐年增高，引起人们对冠心病危险因子愈发重视[4]。高血脂特别是LDL-C增高是引起动脉粥样硬化的主要危险因子，载脂蛋白是构成血浆脂质的主要成分，主要负责运载脂类物质及通过赋予脂类以可溶的形式来稳定脂蛋白，对人体脂质代谢起着决定性作用。ApoE是其中的一种载脂蛋白，富含精氨酸的蛋白质，参与脂蛋白的转化与代谢过程，其基因可以调节许多生物学功能。其主要存在于血浆乳糜微粒、极低密度脂蛋白及其残粒、中间密度脂蛋白和部分高密度脂蛋白中。其中，部分ApoE在血液中与ApoAⅡ形成复合体[6]。研究ApoE基因的多态性对深入了解冠心病的发生和发展具有重要意义[5]。ApoE主要的生理功能有：①作为低度脂蛋白受体的配体，参与人体脂蛋白代谢;②ApoE决定个体血脂水平，与冠心病的发生、发展密切相关;③参与激活水解脂肪的酶类，降低血浆脂质水平。人ApoE的合成部位主要有肝脏、脑组织、肾上腺、卵巢颗粒细胞，脑中生成的ApoE的作用是通过重新分配细胞内的脂类达到脑环境中胆固醇的平衡[7]。

基因多态性（gene polymorphism），也称为遗传多态性（genetic polymorphism），是指在一个生物群体中同时存在多种变异型或基因型[8]。多态性的产生是因为在某些不编码蛋白或没有重要调节功能的基因序列发生变异。研究人类基因的多态性有助于解释人体对疾病的易感性以及遗传性疾病的分子机制。ApoE的异构体由ε2、ε3、ε4三个等位基因编码，人群中有E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4和E4/4 6种表型[9]。研究显示，ApoE基因变异可显著影响人体血脂水平[10]。PCR-RFLP分析是一种常用的DNA分子标记[11-12]。当目的基因存在多态性时，通过PCR扩增，就会产生大小不同的片段，即片段长度多态性，再应用胶电泳分离，可呈现出多态性电泳图谱，可确定是否变异[13-14]。基于上述研究理论，本研究对ApoE基因123 bp 及156 bp 位点HhaⅠ 酶切多态性进行分析，结果显示，ApoE基因上述两位点的多态性改变和血浆LDL-C水平及载脂蛋白B的功能水平存在相关性，表明在冠状动脉粥样硬化发生的复杂机制中，ApoE基因多态性改变可能也参与其中[15]。载脂蛋白B是LDL-C的载体，它的水平直接影响血浆LDL-C水平，而ApoE的功能状态又直接影响载脂蛋白B的功能水平，由此得知，ApoE基因多态性改变可以间接影响血LDL-C的水平，从而影响冠状动脉粥样硬化的发生和发展。因此，ApoE基因的改变必然会导致其分子结构及其功能状态的改变，进而控制和影响血中ApoE与LDL-C水平并与其他危险因子一起协同参与冠心病的形成与发展。

综上所述，ApoE基因多态性特征会明显影响人群中个体的血浆脂质水平，增加人群中个体发生冠心病的危险，为有效预防冠心病提供可靠依据。

[参考文献]

[1]罗风，冯磊.载脂蛋白E基因多态性与冠心病相关性研究进展[J].医学综述，2016，17（3）：452-455..

[2]杨春霞.ApoE基因多态性与男性冠心病严重程度的相关性研究[D].南昌大学，2016.

[3]Ma J，Zhao D，Wang X，et al.LongShengZhi capsule reduces established atherosclerotic lesions in apoE deficient mice by ameliorating hepatic lipid metabolism and inhibiting inflammation[J].J Cardiovasc Pharmacol，2019，73（2）：105-117.

[4]Abd El-Aziz TA，Mohamed RH.LDLR，APoB and ApoE genes polymorphisms and classical risk factors in premature coronary artery disease[J].Gene，2016，26（6）：258-260.

[5]吕小林，万腊根，刘淑媛.冠心病患者APoE基因多态性及其脂质谱相关性研究[J].南昌大学学报（医学版），2016， 19（8）：552-555.

[6]Xu LB，Zhou YF，Yao JL，et al.Apolipoprotein A1 polymorphisms and risk of coronary artery disease：a meta-analysis[J].Arch Med Sci，2017，16（4）：551-556.

[7]胡艷清，马建群.载脂蛋白E基因多态性与心血管疾病关系的研究进展[J].山东医药，2018，16（4）：369-372.

[8]蒋晓钦.载脂蛋白基因多态性与早发冠心病的相关性研究[J].国际检验医学杂志，2017，16（4）：452-455.

[9]Larifla L，Armand C，Bangou J，et al.Association of ApoE gene polymorphism with lipid profile and coronary artery disease in Afro-Caribbeans[J].PLoS One，2017，35（6）：653-655.

[10]阿斯耶·热合曼.青年冠心病患者临床危险因素分析[J].世界最新医学信息文摘，2017，23（6）：326-329.

[11]樊明智，郑洁，周建中.载脂蛋白E基因多态性与血脂代谢及脂蛋白肾病[J].医学信息，2016，29（9）：41-43.

[12]Luo JQ，Ren H，Banh HL，et al.The associations between apolipoprotein E gene epsilon2/epsilon3/epsilon4 polymorphisms and the risk of coronary artery disease in patients with type 2 diabetes mellitus[J].Front Physiol，2017，8（26）：1031-1036.

[13]张小丽.载脂蛋白E基因多态性与血脂代谢及心血管疾病研究进展[D].重庆：重庆医科大学，2016.

[14]朱嫦琳，李炜煊，李美珠.载脂蛋白E基因多态性与心脑血管疾病的相关性[J].实用医学杂志，2017，（16）：173-176.

[15]边素艳，王艳丽，刘宏斌.动脉粥样硬化性心血管病危险分层患者SLCO1B1和载脂蛋白E基因多态性与血脂的关系[J].中华老年心脑血管病杂志，2018，20（7）：259-260.

（收稿日期：2019-03-12  本文编辑：许俊琴）