哈 瑞，李 刚，师志云，武 涛，赵志军，贾 伟△

(1.宁夏医科大学，宁夏银川 750004；宁夏医科大学总医院：2.医学检验中心； 3.预防保健科，宁夏银川 750004;4.宁夏病原微生物重点实验室，宁夏银川 750004)

铜绿假单胞菌为条件致病菌，亦是医院感染的主要病原菌之一[1]。亚胺培南属于碳青霉烯类药物中常用的一种，近年来，耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌引起的感染不断增多，本研究初步对其耐药机制进行了探讨，旨在为临床合理使用抗菌药物治疗铜绿假单胞菌的感染提供较有价值的依据。

1 材料与方法

1.1菌株 随机挑选宁夏医科大学总医院2016年1月至2017年9月各类临床标本中分离的对亚胺培南耐药的非重复铜绿假单胞菌80株。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC 27853。

1.2仪器与试剂 VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统及其配套鉴定卡购自法国梅里埃公司；K-B法药敏纸片及分配器、M-H药敏平板、PCR扩增仪、电泳仪及凝胶成像系统均购自美国Bio-Rad公司；PCR反应试剂2×Power Taq PCR MasterMix购自中国北京百泰克生物技术有限公司；DL2000 Marker购自中国北京全式金生物技术有限公司；合成的引物购自中国上海生物工程股份有限公司。

1.3方法

1.3.1细菌鉴定及药敏试验 保存菌株室温复苏后转种培养18～24 h，K-B纸片扩散法测定其对抗菌药物的敏感性。实验方法及药敏结果判断参照2016年美国临床和实验室标准协会操作规程进行。

1.3.2PCR引物设计 本次试验所要检测的耐药基因引物均参照国内外文献设计[2-7]，所有PCR扩增所需的引物都委托中国上海生物工程有限公司合成。见表1。

表1 靶基因的引物序列