郤庆 徐向辉

摘 要 目的：優化强力益气颗粒的制备工艺。方法：以黄芪甲苷的提取转移率和出膏率为指标，采用正交试验优化煎煮提取中的加水量、煎煮时间及煎煮次数等参数并进行验证试验。结果：最优制备工艺为6味药加10倍量水煎煮提取3次，1 h/次。结论：优化的制备工艺稳定、可行。

关键词 强力益气颗粒 正交试验 制备工艺

中图分类号：R944.27； R286 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2019）17-0073-03

Study on a process for the preparation of Qiangliyiqi granule*

XI Qing1**， XU Xianghui2***（1. Department of Pharmacy， Shanghai Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Shanghai 200082， China； 2. Department of Pharmacy， Shanghai Jiangong Hospital， Shanghai 200083， China）

ABSTRACT Objective： To optimize a process for the preparation of Qiangliyiqi granule. Methods： The parameters such as water addition， boiling time and boiling times in the decoction extraction were optimized by orthogonal test taking the extraction transfer rate and the paste rate of astragaloside IV as indicators， and the verification test was also performed. Results： The optimal preparation process was as follows： 10 fold amount of water was added into 6 kinds of Chinese medicines and then decoction extraction was performed for 3 times with one hour each. Conclusion： The optimized process is stable and feasible.

KEy WORDS Qiangliyiqi granule； orthogonal test； preparation process

中医认为恶性肿瘤是多种因素长期作用于人体导致的正气受损，气滞血瘀、癌毒内生。故中医治疗中多以扶正、固本、健脾、补肾等增强机体的抗病能力，减轻放、化疗对机体带来的损伤，使白细胞恢复正常[1]。放、化疗后白细胞减少的病因、病机为：脾胃受损、气血亏需。脾为后天之本，气血生化之源，脾气虚则气血生化无源。临床表现为白细胞减少，并伴有神疲倦怠、头晕乏力等症候，属于虚劳范畴[2]。研究发现[3]，在内服中药复方治疗白细胞减少症的临床研究中，补虚类中药的使用频率远高于其他类别（71.2%），补虚类中药能提高粒单系祖细胞产率（CFU-GM），具有促进正常造血干细胞生长的作用。强力益气颗粒正是根据中医“虚则补之，损则益之”的理论，经过多年临床实践总结所得的经验方。方中黄芪具有补气升阳、固表止汗、脱毒排脓之功，所含的皂苷类、多糖类等主要成分在免疫调节，抗肿瘤等方面具有主要的作用[4]。淫羊藿中主要活性成分淫羊藿苷对机体主要的中枢免疫器官胸腺和脾脏等具有重要的免疫调节功能，可明显增强化疗、辐射所致的免疫抑制小鼠NK细胞活性，淫羊藿苷达到一定浓度还可以提高肿瘤患者LAK细胞以及NK细胞的活性。补益类中药党参、柴胡、白术扶正固本，能增强机体的免疫功能。患者长期用药，未见明显不良反应发生，疗效确切，安全性好，且价格低廉，服用方便，这为强力益气颗粒的进一步开发提供了坚实的临床基础。

1 材料

1.1 仪器

1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；3300蒸发光散射检测器（Alltech公司）；CP225D电子天平（德国Sartorius公司）。

1.2 药材、药品与试剂

黄芪甲苷对照品（批号：171241-201001，纯度：99.7%），来源于中国食品药品检定研究院。甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。黄芪等药材购自上海万仕诚国药制品有限公司，经上海市中西医结合医院副主任药师吴婉静鉴定，符合现行《中华人民共和国药典》各药材项下的规定。其中黄芪药材中黄芪甲苷的含量为0.056%。

2 方法与结果

2.1 提取正交试验

为确定6个药材提取的煎煮最佳工艺，选取加水量、提取次数、提取时间为考察因素，选用L9（34）正交表，以黄芪甲苷的提取率为指标，进行了9次试验（表1）。

2.2 黄芪甲苷的含量测定方法[5]

2.2.1 色谱条件[4]

Ultimate C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，粒径5μm）；流动相为乙腈-水（32∶68）；流速为1.0 ml/ min；柱温为30 ℃；进样量为10 μl；蒸发光散射检测器漂移管温度60 ℃，空气流速为2.0 L/min。

2.2.2 對照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品12.64 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备

精密量取各提取液5 ml，置分液漏斗中，加入水饱和的正丁醇振摇提取4次，20 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，20 ml/次，正丁醇液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，摇匀，滤过，即得[6]。

2.2.4 阴性样品溶液的制备

取缺失黄芪的其他药材按照处方工艺制备阴性样品，照供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。

2.2.5 测定方法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

2.2.6 专属性考察

精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液与阴性样品溶液各20 μl，按上述色谱条件测定。结果表明，供试品色谱中呈现与对照品色谱主峰保留时间一致的色谱峰，且阴性样品无干扰。

2.2.7 标准曲线的制备

精密称取黄芪甲苷对照品25.32 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述母液2 ml、3 ml、5 ml、7 ml分置于10 ml量瓶中加流动相定容、摇匀，即得。

分别精密吸取上述对照品溶液及对照品母液各20 μl注入液相色谱仪，依法测定并记录峰面积，以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分均值为纵坐标，绘制标准曲线。

黄芪甲苷的回归方程为y=1.634 2 x+1.054 7（r2= 0.999 4）。结果表明黄芪甲苷的进样量在4.051 2～20.256μg范围内，峰面积与浓度之间线性关系良好。

2.2.8 精密度试验

精密量取对照品溶液，连续进样6次，每次20 μl，记录峰面积，结果黄芪甲苷的峰面积RSD为1.2%，表明色谱系统连续进样时精密度良好。

2.2.9 溶液稳定性试验

精密量取供试品溶液，分别于0 h，4 h，8 h，12 h进样，每次20 μl，记录峰面积，结果4个时间点黄芪甲苷的峰面积RSD为1.6%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.2.10 重复性试验

分别量取供试液6份，每份5 ml，按照供试品溶液制备方法处理，结果6份供试品黄芪甲苷的含量RSD为1.5%，说明方法重复性较好。

2.2.11 数据处理及分析

根据L9（34）正交表，试验结果及方差分析见表2、表3和表4。

由表4、表5可知，因素A、B对结果有显著性影响，因素C没有显著性影响。最佳提取工艺为A3B3C1，即加10倍量水，煎煮3次，1 h/次。

2.2.12 最佳工艺的验证

为了验证提取工艺的合理性与稳定性，称取3份1倍处方比例药材按最佳工艺进行试验，结果见表5。

由表5可知，3次提取工艺验证试验结果与上述正交试验的最佳工艺结果较为一致，且数据比较平行，说明该最佳工艺稳定可行。

3 讨论

1）蒸发光散射检测器对于无紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物，是一个很好的补充，但不能用不挥发的盐或溶剂做流动相，基线噪音较大、灵敏度低是主要缺点。其中载气流速这个参数的设置会对色谱峰的信噪比和保留时间产生影响，漂移管的温度过高或过低都会直接影响溶剂的挥发程度，以致于影响基线的稳定性。所以我们在试验过程中反复摸索，最后确定漂移管温度60℃，空气流速2.0 L/min时，方法中色谱峰的基线噪音最小，样品保留时间合适并且稳定。

2）提取液的制备方法。为了减小测定误差，首先采取了直接水提取后直接进样的方式，发现色谱峰较多，阴性样品存在干扰。后尝试过D101大孔树脂等方法，均没有正丁醇萃取提取率高，且干扰小。最后确定供试液的制备方法为正丁醇萃取后加氨试液洗涤。经方法学验证该方法较稳定可行。

参考文献

[1] 于淼. 补气生血、温补肾阳类中药辅助治疗肿瘤患者因化疗致白细胞减少症的疗效分析[J]. 中国现代药物应用， 2016， 10（6）： 256-257.

[2] 李轶群， 黄学武. 八珍汤加减预防肿瘤化疗后白细胞减少症32例临床观察[J]. 河北中医， 2006， 78（10）： 755-756.

[3] 李虹， 张蓉蓉. 中药复方治疗白细胞减少症用药规律分析[J]. 中医， 2015， 56（4）： 338-341.

[4] 杜现华， 杜心佳， 张克信， 等. 黄芪注射液配合化疗治疗恶性肿瘤临床观察[J]. 上海医药， 2000， 21（2）： 16-18.

[5] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（2015年版）一部[M]. 北京： 人民卫生出版社， 2015： 302.

[6] 段立军， 孙博航. 黄芪甲苷的研究进展[J]. 沈阳药科大学学报， 2011， 28（5）： 410-416.