孙玉飞

摘 要 硝基呋喃类药物是一类合成的抗菌药物总称， 对多数革兰氏阳性、阴性细菌有抗菌作用，该药价格低廉，抗菌疗效好，曾被广泛应用于畜禽和水产养殖业，治疗由大肠杆菌或沙门氏菌所引发的疾病。硝基呋喃类药物及其代谢物对人體危害较大有致畸、致突变和可疑致癌作用。硝基呋喃类药物对光敏感，在动物体内代谢速度快，而代谢物以蛋白结合物的形式可以长期保持稳定状态，特别是水产品中硝基呋喃类代谢物残留会通过食物链进行富集，最终对人体健康产生危害，我国2002 年农业部第193 号公告禁止使用呋喃唑酮和呋喃他酮，2005 年农业部第560 号公告将呋喃妥因和呋喃西林列入首批《兽药地方标准废止目录》，硝基呋喃类药物及其代谢物的检测对保证食品安全具有重要意义。

关键词 液相色谱-串联质谱法 水产品 硝基呋喃类代谢物 研究

由于硝基呋喃类药物代谢迅速，通常以硝基呋喃类药物代谢物为目标分析物。液相色谱-质谱联用法具有检测限低、灵敏度高、抗干扰能力强、定性定量准确等特点，所以广泛应用于硝基呋喃代谢物的检测和确证。我国已制定了很多相关标准如《兽药残留检测标准操作规程-2008 肌肉组织中硝基呋喃类代谢物残留检测方法——高效液相色谱-串联质谱法》、《农业部783号公告-1-2006 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》、《GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，使用液液萃取方法对硝基呋喃代谢物进行提取，内标法定量，该方法操作简便，回收率良好，检测速度较快，适合开展水产品中硝基呋喃类代谢物的检测工作。

样品的制备：样品中脂肪对检测影响较大，在样品制备时要尽量选取水产品的肌肉部分充分均质。

水解和衍生化：称取2g均质后样品于50ml离心管中进行衍生，衍生试剂选择0.2mol/L的盐酸和2-硝基苯甲醛的二甲亚砜溶液。衍生效果对检测结果影响较大，可适当增大2-硝基苯甲醛的用量，实验中采用0.1g 2-硝基苯甲醛溶于10ml二甲亚砜溶液中，效果良好。二甲基亚砜是一种含硫有机化合物，常温下为无色无臭的透明液体，是一种吸湿性的可燃液体。具有高极性、高沸点、热稳定性好、非质子、与水混溶的特性，能溶于乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多数有机物，被誉为"万能溶剂”，本实验中选择二甲亚砜作为溶剂效果较好。将样品37℃恒温水浴振荡16小时，由于硝基呋喃类药物对光敏感，恒温水浴时要注意避光。

提取净化：使用乙酸乙酯进行液液萃取净化。对衍生后的溶液加入5ml 1mol/ L的磷酸二氢钾溶液，注意调节溶液的pH，pH值在7.0-7.5之间效果最好，可以使用1mol/L的氢氧化钠进行调节。每次使用4ml的乙酸乙酯至少进行两次提取。合并提取液氮气吹干，采用流动相初始浓度溶液或10%的甲醇水复溶。

实验所用仪器为超高效液相色谱质谱联用仪Waters TQD型号，不同仪器需要根据实际情况调整液相条件和质谱条件。

液相条件：A相为甲醇，B相为加入0.05%甲酸水的2mmol/L的乙酸铵溶液，流速为0.3ml/min。实验中乙酸铵可以有效的改善峰型。注意乙酸铵容易污染仪器，不可超过2mmol/L，每次检测后用大量水进行冲洗。

质谱条件：电喷雾电离元（ESI）；正离子扫描；多反应监测（MRM）模式；毛细管电压：3.00 kV ；锥孔电压：30 V ；脱溶剂气体温度：350℃；脱溶剂气体流量：700 L/h ；锥孔气体流量：150 L/h；以子母离子的保留时间和丰度比定性，以峰面积定量。

采用超高效液相色谱– 串联质谱法测定水产品中的硝基呋喃代谢物，该法简便、可靠，检出限低，准确度和精密度符合残留分析要求，能满足相关部门的监督检测需求，在实际检测过程中可根据实际情况对相关标准进行优化操作，以得到满意检测结果。