蔡芳玲 焦国莲 杨进才

摘 要 本研究将采集自河南某猪场的疑似感染PEDV的猪肠道及其内容物处理后接种于Vero细胞并进行连续体外传代培养。经过S基因遗传进化分析、RT-PCR和间接免疫荧光试验等成功在体外分离鉴定了该毒株，并命名为PEDV HNLB。该毒株能够在Vero细胞上稳定传代并产生典型的细胞病变效应（CPEs），其第6代的病毒滴度达到104.3TCID50/mL。HNLB毒株的成功分离为今后研制新型、有效的PEDV疫苗奠定了基础。

关键词 猪流行性腹泻病毒；毒株分离鉴定；疫苗

Isolation and Identification of Porcine Epidemic Diarrhea Virus HNLB Strain

Abstract： In this study， the pig intestinal tract and its contents collected from a suspected PEDV infected in a pig farm in Henan were treated and inoculated into Vero cells and subjected to continuous in vitro subculture. The strain was successfully isolated and identified in vitro by S gene genetic evolution analysis， RT-PCR and indirect immunofluorescence assay， and named as PEDV HNLB. The strain was able to stably pass on Vero cells and produce typical cytopathic effects （CPEs） with a 6th generation virus titer of 104.3 TCID50/mL. The successful isolation of the HNLB strain laid the foundation for the development of a new and effective PEDV vaccine in the future.

Key words： Porcine epidemic diarrhea virus； Isolation and Identification； Vaccine

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是由流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）引起的一种以腹泻、呕吐、脱水、厌食和极度消瘦为主要特征的高度接触性肠道传染病[1， 2]。所有日龄的猪均易感染，且不同日龄的猪感染后临床症状有明显差别，成年猪出现轻微腹泻症状，死亡率较低，而新生仔猪感染后症状较为严重，其感染率和死亡率高达80%-100%[3]。PED给我国养猪业带来了巨大的经济损失，成为目前亟待解决的一大难题。

PEDV属于尼多病毒目、冠状病毒科、α-冠状病毒属成员，病毒粒子形态呈球形，有囊膜似皇冠状[4]。病毒核酸为不分节段的、线性、单股正链RNA病毒。PEDV基因组全长约为28-30 Kb[5]，由5′非编码区（UTR）、七个开放阅读框（ORFs）和3′非编码区（UTR）组成。病毒基因组结构为5′-复制酶（1a/1b）-S-ORF3-E-M-N-3′。5′端有帽子结构，3′端有polyA尾巴结构。七个ORFs编码三种非结构蛋白，即ORF1a、ORF1b和ORF3，以及四种结构蛋白，分别为纤突糖蛋白（S）、小分子膜蛋白（E）、膜糖蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。

PED于1971年首次在英国被报导，但并未从感染猪只中分离出猪流行性腹泻病毒[2]。1978年，比利时暴发PED疫情并从发病猪肠道内容物中分离出了PEDV CV777毒株[6]。……