（海南省第三人民医院 泌尿外科，海南 三亚 572000）

前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤，在欧美等一些发达国家，前列腺癌在男性恶性肿瘤的发病率仅次于肺癌[1]。我国前列腺癌的发病率和病死率相对较低，但由于生活习惯的改变、诊疗技术的革新及人口老龄化等因素，我国前列腺癌的发病率逐年上升，严重威胁我国男性健康[2-3]。目前，前列腺癌的治疗方法还是常规手术切除再辅助放化疗等，然而，5%的前列腺癌患者在诊断时仍然存在转移性病变。为使晚期前列腺癌患者获得满意的治疗效果，迫切需要找到一种更有效治疗前列腺癌的新指标[4]。MicroRNA（miRNA）是长度约为22核苷酸的非编码RNA，在细胞增殖分化和凋亡等生物过程中发挥重要作用[5]。通过Oncomine数据库整合前列腺癌组织（对比于正常前列腺组织）表达谱分析发现microRNA-802（miR-802）在前列腺癌中升高，提示miR-802可能在前列腺癌中起关键作用。RAB23是Hedgehog（Hh）信号通路的负调控因子，与肝癌、肺癌、胃癌等多种肿瘤密切相关，而目前RAB23与前列腺癌关系研究相对较少，其在前列腺癌中的作用尚未清楚[6-8]。因此，本研究通过探讨前列腺癌组织中miR-802和RAB23表达水平及RAB23与病理参数的关系，为前列腺癌的预后及治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月—2016年12月在海南省第三人民医院泌尿外科手术切除的前列腺癌标本60例。年龄（68.74±6.82）岁，并选取其相对应癌旁组织（距肿瘤边缘＞5 cm）作为对照。术后立即将标本置于液氮中保存。纳入标准：①初次治疗，临床和病理资料保存完好；②无其他类型的肿瘤且无转移；③术前未接受放化疗及雄激素剥夺治疗；④所有标本均经病理学证实。收集患者年龄、血清前列腺特异抗原（prostate specific antigen,PSA）水平、Gleason 评分、病理分期及手术切缘阳性等情况。生化复发：前列腺癌术后连续2次PSA监测水平均超过0.2 μg/L。

1.2 免疫组织化学检测miR-802和RAB23的表达

取前列腺癌组织及癌旁组织病理石蜡块进行切片，厚度为3 μm，经烤片、脱蜡、脱水后进行抗原修复，滴入过氧化氢阻断内源性过氧化氢酶活性，分别加入兔多克隆miR-802抗体和兔多克隆RAB23抗体（美国 Santa Cruz公司）（稀释比 1∶ 100），4℃过夜，加入辣根过氧化物酶HRP标记亲和纯化山羊抗兔二抗（IgG）（武汉艾美捷科技有限公司），室温30 min，DAB显色，苏木精复染，酒精脱水，二甲苯透明，封片。采用双盲法进行结果判定，随机选取5个高倍视野（×400）确定阳性染色细胞的数量和所占的比例。染色强度（I）评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；同时计数阳性细胞百分率（P）；＞50%为3分，＜25%～50%为2分，＜5%～25%为1分，阳性细胞≤5%为0分；组织学评分H=I×P，0～1分为阴性表达，≥2分为阳性表达。

1.3 随访

在手术结束后对患者采用复诊或电话方式进行随访。随访截至2017年12月31日，随访5～53个月，平均25.81个月，无失访者。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0统计软件。计数资料采用例（%）表示，不同组织中miR-802和RAB23的表达差异采用配对χ2检验，miR-802和RAB23的表达情况与前列腺癌患者临床病理特征的关系采用χ2检验进行判断；生存期采用中位数和四分位数M（P25，P75）表示，采用非参数检验；miR-802和RAB23的表达情况与前列癌患者预后采用Kaplan-Meier生存曲线分析，行Log-Rank检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-802和RAB23在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达

miR-802和RAB23在前列腺癌组织中的阳性率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 miR-802和RAB23表达与前列腺癌患者临床病理参数的关系

miR-802和RAB23表达与年龄和术前PSA不相关；与Gleason评分相关，评分越高，表达率越低；与病理分期相关，表达高则病理分期早（P＜0.05）。见表2。

表1 miR-802和RAB23在癌旁组织及前列腺癌组织中的表达比较 [n =60，例（%）]

2.3 miR-802和RAB23表达与前列腺癌患者预后的关系

miR-802和RAB23表达阴性组3年生存率及生存期与miR-802和RAB23表达阳性组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），miR-802和 RAB23表达阴性组较miR-802和RAB23表达阳性组高。见表3和图1。

表2 前列腺癌患者临床病理参数与miR-802和RAB23表达的关系 例（%）

表3 miR-802和RAB23表达与前列腺癌患者预后的关系

图1 miR-802和RAB23表达阳性、阴性组Kaplan-Meier生存曲线

3 讨论

据统计，2016年美国180 890例新发前列腺癌病例，并有26 120例前列腺癌患者死亡，同时，我国前列腺癌病死人数约占全球前列腺癌死亡人数的5%[9-10]。目前关于前列腺癌恶性程度有效的评估指标仍缺乏，同时“肿瘤即是一种基因病”理论已经得到广泛认可。因此，寻找一种或几种前列腺癌标志物可以指导临床诊断和治疗尤为重要。

miRNA最早在1993年被发现，广泛存在于真核生物细胞内，具有高度的组织特异性和保守性，目前已经发现上千种miRNA，占人类基因数量的1%～3%，却调控超过30%的基因表达，约有50%肿瘤的变异区域内可检测到miRNA基因，且其结果具有可重复性，提示miRNA可能与肿瘤发生、发展密切相关[11-13]。同时每个靶基因又受大量miRNA调控，选择与靶基因相关性最高的miRNA进行干预，是一种新的分子靶向治疗方法[14]。通过靶基因的数据库（Targetscan和Pic Tar）对RAB23的靶miRNA进行预测，发现有20个miRNA与RAB23结合，如hsa-miR-425、hsamiR-142-3p、miR-196b、miRNA-802等。再通过热力学稳定性和序列保守性评分，结果发现，miRNA-802作为RAB23的首选靶miRNA作进一步研究。关于miRNA-802的研究最早是在肝组织中，当肝组织受损时，miRNA-802的表达升高，且其升高程度与肝组织受损程度呈正相关[15]。基因干扰是引起特定基因达到沉默作用的技术，被《Science》誉为2002年度生物科技重大突破项目的第一位[16]。通过基因干扰技术，阻断miRNA-802的表达，为抑制RAB23活性提供了可能[17]。

RAB23是RAB家族的重要成员，位于染色体6pl1-6p12，参与了调控细胞膜及囊泡的物质运输，从而影响细胞增殖和迁移[18]。RAB家族成员中有几个可以是恶性肿瘤的驱动因素，RAB23与癌症关系最为突出，且研究较为清楚。RAB23主要有持续激活型RAB23、持续抑制型RAB23和野生型RAB23。通过转染，用显微镜观察发现，持续激活型RAB23和野生型RAB23主要表达于细胞内，而持续抑制型RAB23主要表达于胞浆，通过对Hh信号通路的负调控作用，将信息传递到细胞内[19]。研究发现，RAB23在肝癌、胃癌、乳腺癌及前列腺癌等组织中高表达，且与肿瘤大小呈正相关，说明RAB23促进肿瘤细胞的增殖和迁移[20]。本研究结果显示，miR-802和RAB23在前列腺癌组织中的阳性率高于癌旁组织；miR-802和RAB23表达与Gleason评分相关，评分越高，表达率越低；miR-802和RAB23表达与病理分期相关，表达高则病理分期早；miR-802和RAB23表达阴性组3年生存率及生存期均高于miR-802和RAB23表达阳性组。

综上所述，miR-802和RAB23 mRNA在前列腺癌组织中的表达阳性率高于癌旁组织，阴性表达能获得较好的预后。本研究推断miR-802和RAB23在前列腺癌的发生发展过程中发挥重要作用，有望成为前列腺癌早期诊断、预后判断及个体化治疗的新型分子标志物。