马维超，邓昱晨，邓伟，张倩，2，穆祥*

（1.北京农学院动物科学技术学院兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京102206；2.中国农业大学动物医学院，北京100193）

我国是养殖业大国，随着人们对肉蛋奶需求量的日益增大，畜禽养殖量也是逐年增加。虽然我国一直非常注重食品、药品安全的问题，但是仍然存在许多不足。当前抗生素、化药的耐药性日益严重，超级菌株不断出现，已经威胁到人畜的生命安全；并且抗生素、化药的滥用，在动物性食品中严重残留，威胁到人类的食品安全；此外，这些药物通过粪尿在土壤中严重残留，威胁到人类的环境安全[1]。我国中兽药资源丰富，历史悠久，有着独特的优势。提倡绿色养殖，在合理使用抗生素的基础上，使用复方中药来解决当下问题是一个行之有效的解决办法。

花椒是我国传统的“八大调味品”之一，栽培历史悠久，资源丰富。在中药中花椒籽称椒目，在我国产量丰富，是花椒果皮生产中的主要副产物，其理论产量是花椒果皮的120%，但是长期以来未被充分利用[2]。花椒籽中含有丰富的蛋白成分具有抗菌，抗氧化，降血压等功能亟待开发以充分利用[3]。花椒籽味苦、辛，性寒，有小毒，主入脾、膀胱二经，具有利水、平喘之功效，主治水肿胀满、痰饮喘逆之症，兼有治疗盗汗、肾虚、耳鸣等功效[4]。本试验中以花椒籽为主药来探究在绿色养殖大背景下对动物生产有无积极意义。

1 材料和方法

1.1 试验动物选择与分组

试验选用10-12g雄性Bal/bc小鼠60只，随机分成4组，试验周期为15天。Ⅰ组为空白对照组，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为低、中、高剂量组。

1.2 试验材料

复方中草药以健脾益气、醒脾开胃、消食导滞为主要组方原则配制。复方中草药主要包括：花椒籽、炒白术、生甘草等，均购自北京同仁堂；基础日粮使用大小鼠维持饲料购自北京科澳协力饲料有限公司，给药组饲料在此基础上添加中药复方，添加量不超过1%。

1.3 饲养管理

各组自由采食和饮水，严格按照常规饲养条件进行试验。试验期间详细记录各组的采食量及各组小鼠的健康状况。

1.4 测定指标和方法

1.4.1 生长性能

分别在第1天和第15天称量体重和采食量，计算各组平均日增重、平均日采食量和料肉比。

1.4.2 生长因子以及血清生化指标的测定

试验结束后，对每个试验组小鼠眼球采血，室温静置1h后3000r/min离心10min收集血清。每组随机抽取5只小鼠检测血清总蛋白（TP）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、白蛋白（ALB）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）含量。其余小鼠使用酶联生物生长激素释放肽、生长激素抑制激素、胰岛素样因子Ⅰ试剂盒检测其血清中对应因子的含量。

1.4.3 免疫器官指数测定及CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖功能

小鼠采血后进行解剖，无菌取脾脏和胸腺并称重，计算免疫器官指数。每组随机取5只研磨脾脏，制成脾细胞悬液。裂解红细胞并用无菌的PBS溶液洗涤，细胞计数，确保活细胞数在95%以上。最后用含10%血清的1640细胞培养液将小鼠淋巴细胞浓度调整为5x106细胞/ml。将96孔细胞培养板的每个孔中加入100uL细胞悬液。2h后每孔加入10ul5mg/ml的ConA，24h后每孔加10ulCCK-8(日本同仁），37度孵育2h后，450nm测定OD值。

1.5 统计分析

试验结果用SPSS19.0统计学软件处理，结果采用平均值±标准差表示，以P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。

2 结果

2.1 复方中草药对小鼠生长性能的影响

试验期间对小鼠体重、采食量进行记录，分析结果如图1所示。中剂量组平均日增重极显著高于对照组（P＜0.01），高剂量组显著高于对照组（P＜0.05）；中剂量组料肉比极显著低于对照组（P＜0.01）。可见，中、高剂量组均表现出促进小鼠增长的趋势。

图1 复方中草药对小鼠生长性能的影响

2.2 复方中草药对小鼠生长相关激素释放量的影响

由图2可知，中剂量组生长激素释放肽的释放量显著高于对照组（P＜0.05），生长激素释放抑制激素和胰岛素样因子Ⅰ的释放量与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。

图2 复方中草药对小鼠生长相关激素释放量的影响

表1 复方中草药对小鼠生化指标的影响

2.3 复方中草药对小鼠血清生化指标的影响

由表1可知，低剂量组血清中尿酸和甘油三酯的含量显著低于对照组（P＜0.05），其他指标与对照组相比均无显著差异（P＞0.05）。

2.4 复方中草药对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响

由图3可知，不同剂量组胸腺指数、脾脏指数与对照组相比均无显著差异（P＞0.05）。

图3 复方中草药对小鼠免疫器官指数的影响

2.5 复方中草药对小鼠脾淋巴细胞增殖功能的影响

由图4可知，各试验组小鼠脾淋巴细胞在ConA刺激后均表现出不同程度的增殖。在作用24h后，低剂量组淋巴细胞增殖率显著高于对照组（P＜0.05），中剂量组显著高于对照组（P＜0.05）；在作用48h后，中剂量组淋巴细胞增殖率显著高于对照组（P＜0.05），其他组与对照组相比均无显著差异（P＞0.05)。

图4 复方中草药对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

3 讨论

中草药为天然物质，主要由动植物药和矿物药组成，其中以植物药为主；我国是中草药的发源地，目前拥有约12000种药用植物，是药源最丰富的国家之一[5]。花椒籽作为众多中药中的一种，目前来说研究较少，开发潜力巨大。在姜太玲[6]的研究中对花椒籽中活性蛋白进行研究，研究表明花椒籽中活性蛋白具有很好的热、酸碱、金属离子和有机溶剂稳定性，而表面活性剂能使抗菌蛋白的抑菌活性显著增强。本试验中复方中草药中还包括炒白术和生甘草等，中医认为麸炒白术可用于脾胃不和、运化失常、食少胀满倦怠乏力、表虚自汗[7]。在李滢[8]的研究中印证了炒白术“减酮减燥，增酯增效”炮制理论的合理性与科学性。王志芳[9]认为生甘草外赤而内黄，离包坤土，得土中阴气最强，其味甘而性凉，长于清热解毒，缓急止痛。但其实更重要的是取其“缓和”之性，缓和清热方或温热方中药力迅猛之弊，而令其药力徐徐图之，祛邪务尽而不伤正，或给予正气恢复余地。其实也就是用了甘草的调和药性的作用。

生长激素释放肽(Ghrelin)是一种主要由胃的内分泌细胞(X/A样细胞)分泌的脑肠肽[10]，可以刺激生长激素分泌、调节胃肠道动力、调控胃酸分泌、参与能量代谢、免疫、记忆、睡眠等较为广泛的生物学效应；生长激素释放肽与消化系统疾病之间的关联的研究越来越深入[11]。动物的生长是由许多生长因子调控的，其中生长激素/胰岛素样生长因子-I是调节机体生长的重要调节因子之一。动物生长性能一般通过其经济价值来体现，即平均日增重和料肉比。在本试验中，中剂量组即含有20g/kg复方中草药鼠粮组可以极显著提高Bal/bc小鼠的平均日增重（P＜0.01），且料肉比极显著低于对照组（P＜0.01），说明中剂量组小鼠饲料转化率显著升高，可能与饲料中添加的中药有关。高剂量组平均日增重显著高于对照组（P＜0.05），但料肉比与对照组相比无显著差异（P＞0.05）。通过检测血清中三种生长因子的含量可以了解到中剂量组生长激素释放肽的释放量显著高于对照组（P＜0.05），生长激素释放抑制激素和胰岛素样因子Ⅰ的释放量与对照组相比差异不显著（P＞0.05）。血液生化指标是机体生理代谢状况的直观反映，可以通过检测血液生化指标了解机体新陈代谢机能及营养物质代谢状况[13]。结果中低剂量组血清中尿酸和甘油三酯的含量显著低于对照组（P＜0.05），而其他组与对照组相比均无显著差异，说明中、高剂量组小鼠代谢良好机能正常，但低剂量组还需进一步探讨。

脾脏指数和胸腺指数是两个衡量机体免疫功能的指标，一般认为，两个指数值升高与机体免疫功能提高成正相关。本试验中发现中草药复方对小鼠免疫功能有一定提高，但也没有产生不利影响。脾淋巴细胞增殖是反映机体细胞免疫与体液免疫最直接的指标，通过促进淋巴细胞增殖，达到增强机体免疫力的目的。庞敏[14]等研究中术芩总多糖能促进免疫抑制小鼠体外淋巴细胞增殖，增强免疫功能。本试验中各试验组小鼠脾淋巴细胞在ConA刺激后均表现出不同程度的增殖。在作用24h后，低剂量组淋巴细胞增殖率显著高于对照组（P＜0.05），中剂量组显著高于对照组（P＜0.05）；在作用48h后，中剂量组淋巴细胞增殖率显著高于对照组（P＜0.05），说明中剂量组可以提高小鼠的免疫功能。

综上所述，在鼠粮中添加20g/kg复方中草药可以显著提高Bal/bc小鼠的生长性能，并且可以一定程度上提高其免疫功能。