付长华，郞明洋

（花园药业股份有限公司，浙江 金华 322121）

罗红霉素氨溴索胶囊是由盐酸氨溴索与罗红霉素两种成分组成的复方制剂。氨溴索可增强罗红霉素的抗菌活性。另外，氨溴索具有对肺部多重保护作用的专属特点，对呼吸系统疾病的喘、咳、痰、炎四症均具有一定的治疗和缓解作用。罗红霉素和盐酸氨溴索的单方制剂目前在临床上应用广泛，并常常联合用药。罗红霉素氨溴索胶囊主要用于治疗由罗红霉素敏感微生物引起的细菌性急性支气管炎、慢性支气管炎的急性加重、支气管肺炎、典型性病原体肺炎、合并细菌感染的支气管哮喘或支气管扩张等。临床上，罗红霉素氨溴索分散片用于治疗急性下呼吸道细菌性感染，祛痰疗效的临床控制率及咳痰相关症状的消失时间方面优于罗红霉素胶囊[1]。罗红霉素联合氨溴索可显著改善支气管扩张症患者的咳痰、肺功能及呼吸困难等症状，临床效果显著[2]。

通过对不同色谱条件的考察，建立了同时测定罗红霉素氨溴索胶囊中罗红霉素和盐酸氨溴索两种药物含量的HPLC检测方法。

1 仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪（LC-10ATVP），检测器（SPD-10AVP），浙江大学色谱工作站（N2000）。乙腈为色谱纯，醋酸铵、枸橼酸、三乙胺均为分析纯，检测用水为超纯水。罗红霉素氨溴索胶囊样品及空白辅料提供单位：花园药业股份有限公司，批号：20170301、201700302、20170303；规格：每粒含罗红霉素0.15 g，氨溴索0.03 g。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用C18柱，以乙腈-0.64%醋酸铵（含1.05%枸橼酸，用三乙胺调pH值为6.7）-甲醇（38：35：27）为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长为230 nm。理论板数＞3000，分离度＞1.5。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液的制备

取样品研碎，混匀，精密称取药粉适量（约相当于罗红霉素0.225 g，盐酸氨溴索0.045 g），放入50 mL量瓶中，溶解稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸氨溴索和罗红霉素对照品适量，同上法制成每1 mL中约含盐酸氨溴索0.9 mg和罗红霉素4.5 mg的溶液作为对照品溶液。

2.3 检测波长的选择

精密称取盐酸氨溴索和罗红霉素对照品适量，制成每1 mL中约含盐酸氨溴索0.020 mg、罗红霉素0.4 mg的溶液，得溶液1、溶液2；再取上述两溶液少量，同体积混合得溶液3。将3种溶液在200～400 nm波长范围内分别进行扫描，结果为罗红霉素在末端有最大吸收；盐酸氨溴索在305 nm、247 nm、224 nm及211 nm的波长处有最大吸收，经过实验，在211 nm及224 nm处，基线不平，在230 nm处罗红霉素和盐酸氨溴索均有较大吸收，且基线较平，因此选择230 nm作为有关物质的检测波长。

2.4 系统适用性试验

在上述色谱条件下，经HPLC法测定盐酸氨溴索、罗红霉素和样品中其他组分的色谱峰可分离，分离度大于1.5，理论板数均在3000以上。

2018年9月25日，习近平总书记亲临黑龙江垦区考察，并对农垦定位、发展战略、深化改革、粮食生产、绿色发展、农业科技等工作作出了一系列重要指示，为推进农垦改革发展指明了方向。垦区广大干部群众备受鼓舞，更加坚定了推进农垦改革发展的信心和决心。集团（总局）党委把学习宣传贯彻习近平总书记在垦区考察时的重要讲话精神作为首要政治任务，以把握精神实质、核心要义、统一思想行动为根本，以推动农垦改革发展为目标，注重以上率下，注重全面系统，注重知行合一，在“高”“广”“深”“实”上发力，高标准高质量地做好习近平总书记重要讲话精神的学习宣传贯彻工作，收到了良好的效果。

图1 罗红霉素和盐酸氨溴索对照品及样品的高效液相色谱图

2.5 标准曲线的测定

精密称取297.4 mg罗红霉素对照品和56.3 mg盐酸氨溴索对照品，置于25 mL容量瓶中稀释，分别量取 1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL，放入10 mL容量瓶稀释，取20μL进针记录图谱，以A与C作曲线。

表1 罗红霉素不同浓度及其峰面积

罗红霉素线性回归方程式：A=169729.3884C+11071.8758，R=0.9995。 结论：罗红霉素在1.125～6.752 mg/mL范围内，线性关系良好。

表2 盐酸氨溴索不同浓度及其峰面积

盐酸氨溴索线性回归方程式：A=9039841.9729C+202009.9996，R=0.9996。 结论：盐酸氨溴索在0.225～1.351 mg/mL范围内，线性关系良好。

2.6 空白辅料干扰试验

按罗红霉素氨溴索胶囊处方组成，取空白辅料，按制备工艺要求制成缺味样品。然后，按2.2.1法制成阴性对照溶液，取该溶液与供试品溶液各20μL分别进针记录图谱，进行比较。

结果表明：阴性对照溶液的色谱图与罗红霉素和盐酸氨溴索对照品色谱峰相应位置上没有出现峰，说明空白辅料对该试验没有干扰。

2.7 精密度试验

精密吸取供试品溶液（20170301），重复进样6次，每次20μL，分别测定罗红霉素和盐酸氨溴索峰面积，计算其RSD分别为0.84%和0.94%。见表3。

图2 阴性对照溶液的高效液相色谱图

表3 含量测定精密度试验结果

结果表明：本品测定方法的精密度试验结果良好。

2.8 重现性试验

按含量测定方法，对同一批样品（20170301）分别制备6份供试品溶液，精密吸取各供试品溶液20μL，进行进针检测，记录罗红霉素和盐酸氨溴索色谱图与峰面积，罗红霉素平均含量为99.75%，其RSD为0.66%；盐酸氨溴索平均含量为100.14%，其RSD为0.99%。见表4。

结果表明：本方法重现性好。

2.9 溶液稳定性试验

取供试品溶液（20170301）置于室温下，于0 h、2 h、6 h、12 h、24 h 分别进样 20 μL 进行检测，分别记录罗红霉素和盐酸氨溴索色谱图与峰面积，计算其RSD分别为0.90%和0.74%。见表5。

表4 含量测定重复性结果

表5 溶液的稳定性试验结果

结果表明：供试品溶液在24 h内稳定。

2.1 0 加样回收率试验

精密称取罗红霉素对照品约90 mg、112.5 mg、135 mg及盐酸氨溴索对照品约18 mg、22.5 mg、27 mg各三份，分别置于25 mL量瓶中，分别加入处方量的混合空白辅料，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取盐酸氨溴索与罗红霉素对照品适量，同法检测，记录色谱图，计算即得结果，考察本方法的加样回收率情况。测定结果如表6所示。

表6 含量测定方法的回收率测定结果

结果表明：本品的加样回收率良好。

2.1 1 含量测定

取本品20粒，研细，精密称取药粉适量（罗红霉素约0.225 g，盐酸氨溴索约0.045 g），按2.2.1法制成供试品溶液；另精密称取2种对照品适量，按2.2.2法制成对照品溶液；分别取20μL进针，计算即得结果。3批罗红霉素氨溴索胶囊样品的罗红霉素和盐酸氨溴索含量测定结果如表7所示。

表7 样品罗红霉素和盐酸氨溴索含量测定结果

3 讨论

参照文献[3]，以乙腈-0.067 mol/L磷酸二氢铵（以三乙胺调节pH值至6.5）（35∶65）为流动相，检测波长210 nm，试验结果表明：在该条件下罗红霉素和盐酸氨溴索的保留时间相差较大，且罗红霉素的分离度较差；参照文献[4]，以乙腈-0.64%醋酸铵（含1.05%枸橼酸，用三乙胺调节pH值至6.8）-甲醇（48 ∶25 ∶28）为流动相，检测波长为230 nm，试验结果表明：在该条件下，罗红霉素和盐酸氨溴索的保留时间较理想，分离度与理论塔板数均较好，但盐酸氨溴索有肩峰；调整乙腈-0.64%醋酸铵（含1.05%枸橼酸，以三乙胺调节pH值至6.8）-甲醇三者比例为38∶35∶27后，罗红霉素和盐酸氨溴索两峰峰形良好，保留时间理想，分离度与理论塔板数均较好，因此确定本品有关物质检查流动相为：乙腈-0.64%醋酸铵（含1.05%枸橼酸，以三乙胺调节pH值至6.7）-甲醇（38∶35∶27）。本研究采用HPLC法同时测定罗红霉素氨溴索胶囊中罗红霉素和盐酸氨溴索的含量，在规定的色谱条件下，可用于罗红霉素氨溴索胶囊的质量控制。