张 黎 刘萍丹 张艳朵 郑龙龙

1.山西农业大学动物科学技术学院，山西太谷 030801；2.云南省文山壮族苗族自治州广南县农业农村和科学技术局，云南广南 663300；3.云南省文山壮族苗族自治州广南县者兔乡畜牧兽医站，云南广南 663300

猪链球菌广泛存在于猪的上呼吸道、消化道和生殖道，该菌可在无临床症状的情况下定殖。猪链球菌病在临床上主要分为脑炎型、败血型、关节型和淋巴结炎型，其中败血型链球菌病发病最急，死亡率最高，危害最为严重[1-2]。猪败血型链球菌病一年四季都可感染，其来势猛、病程短、死亡率高，患病猪皮肤发红，脾脏肿大，与非洲猪瘟临床症状部分相似[3]，给养殖户造成巨大心理恐慌。因此，在临床中需要根据当地药物敏感性选择合适的药物配合疫苗免疫进行防控。本研究通过分离和鉴定云南广南县部分规模化猪场发病猪的致病细菌，并对分离株进行敏感药物性筛选，为云南广南县规模化猪场发生败血型链球菌的临床用药提供科学参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2019年3月至5月采集来自云南省广南县20个规模化养殖场出现急性死亡，临床上呈现败血型、神经症状的猪肺脏20份，立即分离培养细菌。

1.2 试验材料

MH药敏培养基、葡萄糖肉汤、麦氏比浊管、药敏纸片等，由山西农业大学病理实验室提供。

1.3 细菌分离培养及镜检

按照常规细菌分离方法，将病料接种于葡萄糖肉汤中增菌12 h，取1.5 mL菌液1 000 r/min离心5 min后，弃去1 mL，混匀后取100 μL涂布于绵羊血琼脂平板上，于37℃培养24 h，挑取可疑菌落作纯培养后备用。

将可疑菌落进行涂片，革兰氏染色，在显微镜油镜下观察细菌形态。

1.4 药敏试验

将分离菌株接种到营养肉汤中37℃恒温培养12 h后，使用麦氏比浊管调整菌液浓度到1.5×108个/mL。按常规细菌接种方法取菌液100 μL均匀涂抹在MH药敏培养基上，并贴上标准药敏纸片（直径6 mm），在4℃环境中放置30 min。然后再移入37℃恒温培养箱中培养24 h，观察并测量抑菌圈直径后，判定依据参考美国《临床实验室标准化协会》相关标准。

2 结果与分析

2.1 培养特性

病料经肉汤扩菌后接种于血琼脂平板上，37℃培养24 h，在琼脂平板上长出细小菌落，血琼脂平板上生长的菌落为细小、灰白色、湿润、隆起呈半透明状，菌落周围有明显的β溶血环，界限分明、完全透明的溶血环。

取菌落涂片进行革兰氏染色镜检，可见成对或短链状排列的革兰氏阳性链球菌。

2.2 药敏试验

取上述分离菌按常规纸片法进行药敏试验，结果该分离菌对磷霉素钠、恩诺沙星、阿莫西林、大观霉素高度敏感，对β-内酰胺类（第三代头孢类药物头孢曲松、头孢噻肟、氨苄西林）、截短侧耳素类（泰妙菌素）、氨基糖苷类（新霉素）、四环素类（土霉素、强力霉素）、氯霉素类（氟苯尼考）等药物产生耐药性（表1）。

表1 分离菌对临床常用药物的敏感性

3 讨论

猪链球菌已成为规模化养猪场常见的高度传染性病原菌，其中败血型链球菌病死率较高，是危害最为严重的链球菌之一，可以通过多种渠道感染不同日龄猪群，常与猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、巴氏杆菌混合感染[4-6]。因此，单独使用市场上常见的疫苗进行预防效果欠佳。目前普遍采用多种抗生素综合防控败血型链球菌。因此，选择合适的药物显得尤为重要。

败血型链球菌的病原群、临床症状、感染对象和耐药性均趋于严重化[7-10]，阻碍了养猪业的进一步发展。猪链球菌最初被划分为35个血清型[11-14]，每种血清型都含有较多序列类型，不同的链球菌感染在基因序列、血清、临床症状、人畜共患性和流行潜力等方面具有特异性，导致难以研发通用型疫苗防治不同类型的猪链球菌感染[15-16]，因此迫切需要选择敏感药物对其进行控制。

磷霉素能破坏细菌细胞壁的完整性，并抑制其合成；同时，其还有利于其他药物进入菌体，以不同的机制杀灭细菌。磷霉素与其他药物无交叉耐药性，可以与多种药物发挥协同作用，如与头孢哌酮、亚胺培南等联用对甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌临床分离株的ED50和MIC降低至原来的十分之一至几十分之一[17-19]。

本研究对分离获得的病原菌株进行了7类12种抗生素的药物敏感性分析，结果显示致病性链球菌对磷霉素钠、恩诺沙星、阿莫西林、大观霉素敏感，对β-内酰胺类氨苄西林、阿莫西林、氨基糖苷类新霉素、四环素类土霉素、强力霉素、氯霉素类氟苯尼考产生耐药性，呈现出多重耐药性。