林张军，李 倩，章越凡，芮耀诚

(1.海军军医大学药学院药理学教研室，上海 200433；2.中国人民解放军联勤保障部队第九〇一医院药剂科，安徽 合肥 230031)

动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性炎症反应，其特征为大动脉和中动脉血管壁上形成的脂质斑块[1]。巨噬细胞是AS斑块的重要组成部分，在AS的进展中发挥重要作用。从早期斑块的巨噬细胞浸润、吞噬堆积的脂质和细胞碎片，到最终形成泡沫细胞，巨噬细胞的状态决定了斑块的发展[2]。

自噬现象在降解细胞内的长寿命蛋白、受损细胞器和堆积的脂滴中起关键作用[3]。自噬功能缺陷会诱发泡沫细胞形成，从而促进AS的发展[4-5]。p62/SQSTM1是一种多功能的支架蛋白，它不仅参与自噬过程，还涉及多个细胞信号转导通路[6-9]。在选择性自噬中，p62将泛素化的蛋白携带到自噬小体内降解，同时自身也被降解[6]。然而，在小鼠和人类的AS斑块中检测到了大量堆积的p62蛋白[10-11]，这是一种自噬功能缺陷导致的病理现象，还是一种抗AS的应激反应，目前尚存在争议[12]。并且，p62是否参与了脂滴的自噬性降解暂无定论[13]。因此，本研究拟在氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)诱导的巨噬源性泡沫细胞中探讨p62蛋白对脂质代谢相关的自噬以及炎症因子表达的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞

Raw264.7细胞购自ATCC，GFP-LC3B稳转RAW264.7细胞系由本研究室参照文献方法构建[14]。

1.2 试剂及仪器

DMEM培养基(Hyclone公司)，胎牛血清、青链双抗、胰蛋白酶(Gibco)；兔抗小鼠p62抗体、兔抗小鼠LC3B抗体、兔抗小鼠Nrf2抗体(Cell Signaling Technology)，CF555标记的驴抗兔二抗(Biotium)，兔抗小鼠PEX2抗体(Abgent)，兔抗小鼠Plin2抗体(Abcam)，HRP(辣根过氧化酶)标记的二抗和β-Actin抗体(上海康成生物工程有限公司)；……