王 朋

包头医学院第二附属医院检验科，内蒙古包头 014030

随着临床诊断需求的不断增大，检验项目也在不断增多。全自动生化分析仪可以在有限的时间内检测出大量的标本，以便满足检验周转时间的要求。随着生化分析仪使用年限的延长，仪器的诸多问题也伴随着出现，严重影响检验结果的准确性，给临床诊断带来巨大的误区[1-2]。

交叉污染是诸多问题中最为隐蔽，影响结果最为严重的因素之一[3]。短期内往往通过质量控制难以发现，直到临床反馈结果与患者实际病情不符后再采取纠正，此时对于患者的治疗时效性及检验结果的准确性都带来了不好的影响[4-6]。交叉污染的影响因素种类比较多，其中最主要的影响因素包括比色杯、搅拌棒、试剂针、样品针的污染[7-8]。本实验室最近发现，装机几个月后的AU480 急诊生化分析仪在检测脂肪酶项目时出现结果与临床诊断严重不符的现象，单独复检此项目时，与上次结果差异过大，因此高度怀疑检测系统存在交叉污染现象。本文对此交叉污染现象进行实验分析并提出了相应的改进措施，确保检验结果的准确性。

表1 不同试剂作为样本进行脂肪酶检测的结果

表2 搅拌棒交叉污染实验结果

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 OLYMPUS AU480 全自动生化分析仪；北京仁和惠康PW8 纯水处理系统。

1.1.2 试剂 脂肪酶（LIPS）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、载脂蛋白A-I（ApoA-I）、载脂蛋白B（ApoB）、清洗液（washing solution）由Beckman Coulter 公司提供；浓盐酸分析纯由北京市通广精细化工公司提供；次氯酸钠分析纯由德州润昕实验仪器公司提供；总蛋白（TP）由上海复星长征医学科学有限公司提供；质控品：两个浓度水平正常值（批号：0037）和病理值（批号：0038），均由Beckman Coulter 公司提供。

1.2 方法

1.2.1 仪器精密度的初步判断 混合足够量的新鲜血清为待检标本，重复测定20 次，计算出均数、标准差和变异系数。批内精密度（CV）必须小于卫生部临检中心室间质量评价标准1/4 总误差的要求[9-10]。

1.2.2 检测项目对脂肪酶干扰的初筛实验 通过查阅此生化分析仪所有检测项目的说明书及部分文献，本实验分别将TG，CHO，HDL-C，LDL-C，ApoA-I，ApoB 项目试剂盒内的R1 试剂和R2 试剂作为样本进行脂肪酶检测，结果与空白值进行比较。

1.2.3 仪器搅拌棒的交叉污染排除实验 将患者新鲜标本的混合血清分20 份，分别装在20 个测试杯内， 1 号杯检测疑似污染项目，紧跟其后4 个杯检测脂肪酶，6 号杯检测疑似污染项目，紧跟其4 个杯检测脂肪酶，比较每次脂肪酶结果的差异。

1.2.4 仪器比色杯的交叉污染排除实验 AU480生化分析仪共计88 个比色杯，连续放置11 个样本架，第一个样本架第一个测试位检测TG，第89 个测试位检测LIPA，其他测试位空位。CHO、HDL-C、LDL-C 操作步骤同TG，每个检测项目平行做5 次，取平均值为最终的结果，每个测试结束后都要进行W1 清洗，再做下一个测试项目。

1.2.5 改进后的性能验证实验 首先对仪器的参数进行改进，仪器上检测项目包括双试剂中的R1和R2 在内，在脂肪酶检测前后都要用厂家原装清洗液对搅拌棒清洗3 次，其次对室内质控变异系数（CV%）进行监测，同时对卫生部室间质评的结果进行分析，最后对交叉污染实验再次进行验证。

2 结果

2.1 仪器精密度的初步判断

在做重复性实验之前，将生化分析仪进行W1清洗，保证比色杯，搅拌棒及试剂针清洗干净，混合血清检测LIPA 项目最后的平均值为40.1，标准差为0.875，变异系数（CV）为2.2，变异系数满足实验室质量评价标准要求（1/4 总误差为5%）。

2.2 检测项目对脂肪酶干扰的初筛实验

将待测项目的R1 或R2 试剂分别看作样本检测脂肪酶，结果显示TG、LDL-C、CHO 的R1 试剂对脂肪酶的检测有严重的干扰，HDL-C 的R1 和R2 试剂对脂肪酶的检测都有强干扰。ApoA-I 和ApoB的R1 和R2 试剂及LDL-C 和TG 的R2 试剂检测结果比LIPA 结果略有偏高，此结果是由于待测项目试剂本身的颜色干扰导致仪器读取OD 值时偏高，并非是与脂肪酶反应结束后的结果，因此此结果差异通过正常清洗程序及去试剂空白能够避免，对脂肪酶的检测结果不会造成大的干扰。见表1。

表3 更换清洗液搅拌棒交叉污染实验结果

表5 卫生部室间质评结果

2.3 仪器搅拌棒的交叉污染排除实验

CHO、ApoA-I、ApoB 三 个 项 目 搅 拌 棒 的 携带污染对脂肪酶结果的影响比较小，通过正常的清洗程序可以将其干扰降到最低。TG、HDL-C、LDL-C 对脂肪酶都有严重的干扰，影响比较严重的是HDL-C 检测项目。如果干扰项目和被检项目使用同一组搅拌棒，即使正常清洗3 次也不能将干扰物质清洗干净。见表2。本组实验分别选择酸性洗液（1%HCL），碱性洗液（0.5%NaClO），蛋白洗液（TP）来清洗搅拌棒，结果显示在酸性清洗液条件下，HDL-C 和LDL-C 脂肪酶检测值有所改善，但4次脂肪酶检测结果中还是会有1 次结果偏差很大，其他清洗液并没有改善交叉污染的发生。见表3。

2.4 仪器比色杯的交叉污染排除实验

在仪器上连续放置11 个样本架，在第一个样本架第一个测试位分别检测TG、CHO、HDL-C、LDL-C、ApoA-I 和ApoB，第89 个 测 试 位 检 测LIPA，其他测试位空位。每个检测项目平行做五次，取平均值为最终的结果，每个测试结束后都要进行W1 清洗。实验结果显示每次单独检测完TG、CHO、HDL-C、LDL-C、ApoA-I 和ApoB 再 检 测LIPA 时如果两者使用的是同一个比色杯，LIPA 的结果基本不受影响。正常清洗程序可以将比色杯清洗干净，不会对脂肪酶的结果造成影响。见表4。

表4 比色杯的交叉污染排除实验脂肪酶均值结果

2.5 改进后的性能验证实验

2.5.1 变异系数的监测 为了观察改进后的结果稳定性，本组实验通过室内质控的CV 值变化来监测脂肪酶结果是否受到影响，室内质控在检测血清标本前做一次，检测血清标本后做一次，取两次均值。经过半年的监测脂肪酶两个水平（L1 和L2）的室内质控变异系数（CV）满足实验室质量目标要求（实验室脂肪酶室内质控变异系数质量目标为6.6%），并且随着室内质控数值的逐渐累积，及不断加强人员对质控标准操作的管理，CV 值变化幅度越来越小，表明脂肪酶检测结果的稳定性越来越好。见图1。

2.5.2 准确度的验证 通过卫生部室间质评连续两次每次5 个水平的反馈结果显示，本实验室检测脂肪酶的结果与卫生部的靶值相比没有明显偏差，两次结果均达到100 分。见表5。

图1 改进后室内质控变异系数的变化

2.5.3 搅拌棒交叉污染实验再次验证 将患者新鲜标本的混合血清分20 份，分别装在20 个测试杯内，分别放在样本架1 ～ 10 号孔内， 1 号孔检测疑似污染项目，紧跟其后4 个孔检测脂肪酶，6 号孔检测疑似污染项目，紧跟其4 个孔检测脂肪酶。结果显示干扰项目对脂肪酶检测结果影响已经排除，每个干扰项目后的4 次脂肪酶检测结果偏差很小，脂肪酶结果重复性满足实验室要求，交叉污染彻底得到了解决。见表6。

表6 搅拌棒交叉污染实验再次验证结果

3 讨论

生化分析仪交叉污染的原因主要集中在以下几个方面。一是试剂方面，很多试剂盒的反应成分比较接近，待检项目试剂盒成分恰好是另一种试剂的反应成分，极易引起试剂间的交叉污染；二是仪器方面的因素，生化分析仪试剂针，样本针，搅拌棒，比色杯等环节出现老化，清洗不干净，破损都易造成交叉污染[11-13]。

AU480 全自动生化分析仪具有其特有的仪器构造，试剂针和吸样针分别仅有一根，无论是加试剂还是吸样对冲洗系统的要求非常高，因此在进行交叉污染排除实验时每次必须充分清洗试剂针和吸样针，这样才能完全检出交叉污染[14]。同时由于仪器搅拌棒数量少，使得其易出现搅拌棒的交叉污染，本实验结果表明仪器所有33 项检测项目中，疑似污染的项目有6 项，经过初筛实验确认了污染项目有3 项（TG，HDL-C，LDL-C）。

近些年生化分析仪交叉污染的发生主要集中在试剂间，搅拌棒，比色杯的因素[15-16]，在AU480 生化分析仪检测系统上有关搅拌棒的交叉污染并不多见。本实验发现单独检测血清脂肪酶时，质控结果和临床标本检测结果没有受到影响，通过精密度的初步筛查结果判断，此生化分析仪重复性好，允许不精密度CV 值小于本实验室质量要求，CV 值满足本实验室质量标准。在仪器刚运行开始时，脂肪酶检测结果的室内质控及临床反馈都没有发现有问题，但运行几个月后，临床反馈脂肪酶的检验结果与患者现状严重不符，结果严重偏高，单独复检同一份标本时结果与之前的检测结果差异很大。经过试剂的排查实验（见表1）发现检测完血脂类项目后再检测脂肪酶结果有不同程度的影响，而血脂类项目包括TG，CHO，HDL-C，LDL-C，ApoA-I，ApoB，经过试剂的排查实验初步选出TG，CHO，HDL-C，LDL-C 对脂肪酶检测有干扰，分析原因是由于TG，CHO，HDL-C，LDL-C 这四种试剂盒成分中含有类脂肪酶的成分，在检测这四个项目结束后有可能没有完全冲洗掉这些类脂肪酶的试剂成分，再检测脂肪酶时会造成检测结果偏高。为了验证这种可能性的存在，本实验组对搅拌棒，比色杯进行交叉污染排除实验（见表2 和表4），结果显示搅拌棒存在交叉污染，而比色杯不存在，分析搅拌棒的交叉污染是由于其使用时间过长，平时的日保养和月保养及季度保养不到位，造成表面的涂层逐渐变粗糙，很容易残留脂肪酶。

为了保证检验质量，降低交叉污染率的发生，本实验组对脂肪酶的检测进行了优化，其中包括（1）改变检测项目的顺序。尽量将脂肪酶和血脂类检测项目之间穿插其他检测项目。（2）调整仪器参数，增加搅拌棒的清洗次数。每当检测脂肪酶之前有血脂类项目时都要先用原装清洗液对搅拌棒进行清洗，每当检测血脂类项目后如果有脂肪酶检测项目时对搅拌棒进行清洗。这样大大降低了交叉污染发生率，保证了检测结果的准确性（见表5 ～ 6），但由于清洗次数过多，在大批量标本检测时会降低工作效率， 综合以上因素，最终将搅拌棒清洗次数定为三次，这样既保证了质量，又不会过多影响工作效率，临床的反馈满意度有了很大的提高。

实践证明避免交叉污染的发生，必须对生化分析仪的工作原理，试剂的有效成分及反应原理熟练掌握。同时仪器做好周保养，月保养，季度保养等保养流程，只有这样才能保证发出的每一份检验报告准确。