吕志阳 陈璟 汪洁 陈静 顾雪梅 魏颖 杨雨微

摘   要：采用挤出滚圆法制备山楂叶提取物微丸，建立测定微丸提取物中牡荆素-2-O-鼠李糖苷含量的方法，评价微丸的溶出情况。采用固定微丸的制备工艺，以粉体学为评价指标，优化载药量、水溶性载体材料、润湿剂种类及用量等微丸的处方，采用高效液相法测定山楂叶提取物中牡荆素-2-O-鼠李糖苷的含量。微丸处方为山楂叶提取物∶微晶纤维素∶乳糖∶润湿剂（60%乙醇）质量比为10∶12∶3∶8;色谱条件：流动相四氢呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈（38∶4∶152∶3∶3），检测波长：330 mm，流速为1.0 mL/min，在蒸馏水中30 min时牡荆素-2-O-鼠李糖苷的溶出量达95.2%。所得山楂叶提取物微丸质量好，牡荆素-2-O-鼠李糖苷的含量测定方法实用性强。

关键词：山楂叶提取物;微丸;牡荆素-2-O-鼠李糖苷;溶出

微丸作为多单元型给药系统，一个剂量往往由分散的多个单元组成。可装入胶囊、压制成片剂，或制成其他的制剂，易于制成缓控释、肠溶等不同类型的微丸[1]。微丸由于其粒径小，可以悬浮在胃体的消化液中，在胃中滞留的时间长，生物利用度高，生产工艺简易、具有较大的表面积、流动性好等工艺学优点[2]。挤出滚圆法是目前应用最广泛的制丸法， 该方法操作简便，成品收率高，制得的微丸内药物或其他活性成分的含量均匀[3]。

山楂叶提取物是从山楂树的叶子中提取出来的黄酮类物质，如牡荆素、金丝桃苷、槲皮素、芦丁等，具有降低血脂、降压、增加冠脉流量，耐缺氧等作用[4]。本研究应用挤出滚圆法制备山楂叶提取物微丸，以微丸的粒径、圆整度、脆碎度等粉体学性质作为评价指标，结合微丸中主要成分牡荆素-2-O-鼠李糖苷溶出情况评价制备工艺，为山楂叶提取物微丸的制剂工艺研究及产业化开发提供了可靠的依据。

1    仪器与试药

1.1  仪器

JBZ-300型多功能微丸挤出滚圆机（辽宁医新联）;RCZ-IB型智能溶出试验仪（天大天发科技有限公司）;Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）;AS-20500A超声波清洗器（奥特赛恩斯仪器有限公司）;FA1204B万分之一电子天平（上海精密科学仪器有限公司）;TGL-18C-C型高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）;CJY-300B型片剂脆碎度测试仪（上海黄海药检仪器有限公司）。

1.2  试药

山楂叶提取物（质量分数大于98%，SQSZ20190120，西安圣青生物科技有限公司），牡荆素-2-O-鼠李糖苷对照品（99%，PCS-181022，成都植标化纯生物技术有限公司），乳糖（20160815，中国上海惠兴生化试剂有限公司），可溶性淀粉（43964124U0，上海凌峰化学试剂有限公司），微晶纤维素（Microcrystalline cellulose，MCC）（20150625，国药集团化学试剂有限公司），甘露醇（20160912，国药集团化学试剂有限公司），四氢呋喃、无水乙醇、乙腈（国药集团化学试剂有限公司），乙酸（永华化学科技有限公司），甲醇（山东禹王工业有限公司化学分公司）。

2    方法与结果

2.1  山楂叶提取物微丸的制备

固定挤出滚圆微丸的制备工艺，选取微丸粉体学指标包括：微丸得率（20～30 目间微丸的比例）、脆碎度、圆整度、堆密度等作为评价标准，分别优选微丸的载药量、水溶性辅料的品种、润湿剂的种类及用量等。

2.2.1  山楂叶提取物微丸载药量的考察

山楂叶提取物黏性较大，用量直接影响成丸的优劣，MCC因其适宜的良好的黏合性质和流体学性质，可赋予湿物料足够的凝聚性，具较大的高内部孔隙和比表面积，可以保留和吸收大量的水分，有助于挤出，而通过控制塑性材料中水分迁移，可阻止挤出和滚圆过程中相分离的发生[5]。由其制得的微丸圆整度好、堆密度大、硬度和强度更高，极少出现崩塌现象，应用范围非常广泛[6]。所以本实验以MCC为主要辅料，设置载药量分别为10%、20%、30%、40%、50%、60%，以微丸载药量高、成丸性能佳为筛选目标。加入适量的润湿剂（水）制备软材，并制备微丸，不同的载药量微丸粉体学性质结果，如表1所示。

实验结果表明，载药量对微丸的影响很大，随着载药量不断增大，微丸粉体学性质中得率降低，载药量加大，圆整度增加，同时粒径在20～30 目间微丸的数量在减小，堆密度变化不大。脆碎度先是降低，当载药量达到30%时，脆碎度又升高。但是总体变化并不大。由此可以看出，载药量对于挤出滚圆法制备微丸的影响极为显著。综合载药量和微丸粉体学性质对成丸效果采用加权综合评分原则。总分S=载药量×100+（得率得分-平面临界角得分），评分越高，效果越好，当载药量为40%时各指标综合评分为98.6，明显高于其他载药量下的得分，故本实验选择最优处方的载药量为40%，作为制备工艺研究的处方比率。评分结果如表2所示。

2.2.1  山楂叶提取物微丸水溶性辅料的选择

按照上述制备工艺，选取微丸的载药量为40%，分别以10%的乳糖、可溶性淀粉、PVP、甘露醇作为水溶性辅料[6]，考察微丸的得率（20～30 目间微丸的比例）、圆整度、堆密度和脆碎度等粉体学性质，同时结合微丸中牡荊素-2-O-鼠李糖苷的溶出情况做出综合的评价，微丸粉体学性质结果如表3所示。

添加水溶性辅料后微丸的得率均达到70%以上，其中乳糖组得率最高为80.2%;乳糖的圆整度在这几种水溶性辅料中也是最佳的，堆密度和脆碎度变化不明显。主要成分的溶出度研究发现，加入聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl Pyrrolidone，PVP）和乳糖后药物释放的速度有所提高，30 min牡荆素-2-O-鼠李糖苷累积释药量有所增加，30 min时二者均达90%以上，但PVP的加入使20～30 目的微丸得率明显下降，甘露醇的加入使得药物更加黏稠，制成的微丸成球性能差，得率降低，而乳糖的使用对微丸得率无明显影响，故确定10%乳糖为山楂叶提取物微丸处方中的水溶性辅料。

2.1.3  山楂叶提取物微丸润湿剂的选择

挤出滚圆法制备微丸常用的润湿剂为水或乙醇与水的混合物，山楂叶提取物微丸粉末具有一定的黏性，所以选用蒸馏水或一定比例的乙醇为润湿剂进行实验，分别以水、20%、40%、60%、80%乙醇溶液作为润湿剂，其中，山楂叶提取物∶MCC∶乳糖∶水（乙醇与水的混合物）质量比为10∶12∶3∶8（载药量为40%）进行实验，分别加入适量的上述润湿剂制备软材，制备微丸，比较微丸的各项粉体学性质，结果如表4所示。

结果表明，当使用蒸馏水时，混合物过黏，堵塞模孔，微丸的得率低，随着乙醇质量分数的提高，微丸的得率有所升高，乙醇质量分数的不断提高，所得微丸成长柱状较多，微丸的堆密度略有下降，圆整度显著降低，而脆碎度明显增加，小于30 目的微丸量明显增多。当使用80%乙醇时，微丸的得率降低，形成的微丸成球性能差，故以60%乙醇作为润湿剂时，微丸圆整度最好，得率最高，微丸成球性能好，故本实验选择60%乙醇为润湿剂。

经过对微丸载药量、水溶性辅料及润湿剂的处方单因素考察后，确定最佳处方如下：山楂叶提取物∶MCC∶乳糖∶润湿剂（60%乙醇）质量比为10∶12∶3∶8，所制备的山楂叶提取物微丸质量较好。

2.2  山楂叶提取物微丸中牡荆素-2-O-鼠李糖苷的HPLC含量测定方法

2.2.1  色谱条件

色谱柱：Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱;流动相：四氢呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈（38∶4∶152∶3∶3），检测波长：330 mm，流速为1.0 mL/min，进样量10 µL，柱温30 ℃。此色谱条件下，供试品中牡荆素-2-O-鼠李糖苷能得到较好的分离。

2.2.2  对照品溶液的制备

对照品溶液的制备：取牡荆素-2-O-鼠李糖苷对照品适量，精密称定，置于100 mL容量瓶中，60%乙醇稀释至刻度，摇匀，得到含牡荆素-2-O-鼠李糖苷为95.46 µg/mL。

2.2.3  标准曲线的绘制

精密吸取牡荆素-2-O-鼠李糖苷对照品溶液0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25 mL，置于10 mL容量瓶中，加入60%的甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为0.010、0.025、0.050、0.075、0.100、0.125 mg/mL的对照品溶液。精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制曲线经计算得色谱峰面积与进样量之间的回归方程为：Y=692.52X+20.477，r=0.999 6。结果表明，牡荆素-2-O-鼠李糖苷在0.10～1.25 mL范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2.3  山楂叶提取物微丸中牡荆素-2-O-鼠李糖苷的溶出測定

考察样品在蒸馏水中的溶出情况，选择转篮法测定，溶出介质：900 mL蒸馏水，温度：（37±0.50）℃，转速：100 r/min。称取3份山楂叶提取物微丸适量，分别置于溶出杯中，于30 min取样，每次5 mL，取样后立即以0.45 µm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，留续滤液作为供试品溶液，同时补加新鲜溶出介质5 mL，测定其中的牡荆素-2-O-鼠李糖苷的含量，计算药物的溶出量。结果表明，山楂叶提取物微丸中牡荆素-2-O-鼠李糖苷在蒸馏水介质中30 min时累积溶出达95.20%，溶出效果较好，符合速释制剂要求[7]。

3    结语

微丸的粉体学性质可以用得率、圆整度、堆密度、脆碎度等多指标考察，但在整个处方和工艺因素的选择过程中，微丸的堆密度、脆碎度两项指标均无显著性差别，堆密度均保持在0.87 g/mL左右，而脆碎度波动范围也较小，故选取得率和圆整度作为评价微丸成型性的最主要的考察指标，进而优化微丸处方。主要成分牡荆素-2-O-鼠李糖苷在30 min时溶出达到95%，可满足速释微丸的要求。山楂叶提取物中成分较多，将能够反映该中药主要药效的有效成分作为指标对其进行控制。以山楂叶提取物微丸中的质量分数最高的牡荆素-2-O-鼠李糖苷为指标性成分，确定以四氢呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈（38∶4∶152∶3∶3）梯度洗脱对山楂叶提取物中牡荆素-2-O-鼠李糖苷分离效果较好。

[参考文献]

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[3]张   雪，洪燕龙，鲜洁晨，等.挤出滚圆法制备微丸中软材特征物理性质的研究进展[J].中国医药工业杂志，2014，45（4）：387-391.

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