宋利沙 蒋妮 蓝祖栽 张占江 郭晓云

摘要：【目的】篩选肿节风炭疽菌（Colletotrichum dematium）拮抗真菌，为肿节风炭疽病的生物防治提供科学依据。【方法】采用平板稀释法和平板对峙法从肿节风主产区广西靖西市和都安县健康肿节风根系土壤中筛选出对肿节风炭疽病菌及14种其他植物病原真菌具有较强抑制作用的真菌，采用ELISA试剂盒测定拮抗真菌无菌发酵液中的蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶含量，综合平板对峙培养、抑菌谱及产酶能力选取综合表现最优的拮抗菌株;基于形态学和分子生物学特征对拮抗菌株进行鉴定。【结果】平板对峙试验结果表明，菌株JT-8、JT-3和DT-5对肿节风炭疽病菌具有较强的拮抗作用，其中拮抗作用最强的菌株是JT-8，对炭疽病菌的抑制率达91.57%。抗菌谱测定结果表明，菌株JT-8、JT-3和DT-5对供试14种病原真菌均有明显的拮抗作用，其中拮抗作用最强的为菌株JT-8，平均抑制率达89.88%，该菌株可产生几丁质酶、纤维素酶和蛋白酶，可抑制炭疽病菌菌丝生长，病原菌菌丝表现为扭曲、断裂、分支缠绕和颜色加深等。通过形态学观察和ITS测序鉴定，确定菌株JT-8为淡紫紫孢菌（Purpureocillium lilacinum）。【结论】淡紫紫孢菌对肿节风炭疽病病原菌具有强拮抗作用，能产生多种抗菌活性物质，且广谱抑菌，具有较好的生防开发潜能。

关键词： 肿节风;炭疽病;拮抗真菌;抗菌活性;生物防治

中图分类号： S435.67                       文献标志码： A 文章编号：2095-1191（2019）10-2214-08

Screening and mechanism of fungi antagonistic to Colletotrichum dematium of Sarcandra glabra（Thunb.）

SONG Li-sha1， JIANG Ni1，2*， LAN Zu-zai1， ZHANG Zhan-jiang1， GUO Xiao-yun1

（1Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants， Nanning  530023， China; 2College of Agriculture，

Guangxi Univeisity，Nanning  530004， China ）

Abstract：【Objective】Screening Colletotrichum dematium antagonistic fungi of Sarcandra glabra to provide scienti-fic basis for biological control for S. glabra anthracnose. 【Method】The fungi with strong inhibitory effect on the anthracnose of S. glabra and 14 other plant pathogenic fungi were screened by plate dilution method and plate confrontation me-thod from the health root soil of S. glabra producing areas， Jingxi and Du’an of Guangxi. ELISA kit was used to determine the content of protease， cellulase and chitinase in the aseptic fermentation broth of antagonistic fungi，antagonistic strains with the best comprehensive performance were selected from the plate confrontation culture， antifungal spectrum and enzyme production ability. Antagonistic strains were identified based on morphological and molecular biological characteristics. 【Result】By plate confrontation test， the results showed that the strains JT-8， JT-3 and DT-5 had antagonistic effect against anthracnose of S. glabra， strain JT-8 had the highest antagonistic effect and antagonism rate was 91.57%. Antifungal spectrum tests showed that strains JT-8， JT-3 and DT-5 had antagonistic activities against 14 plant pathogens， JT-8 had the strongest antagonistic activity and antagonism rate was 89.88%. The result of antibiosis mechanism indicated that three strains could produce chitinase， cellulose and protease to inhibit growth of anthracnose bacteria， and the mycelia showed distorted， fractured， with increased and winding branches and deepened color. Based on morphological and ITS rDNA sequence analysis， strain JT-8 was identified as Purpureocillium lilacinum. 【Conclusion】P. lilacinum has strong antagonistic effects against anthracnose of S. glabra，  it can produce a variety of antibacterial substances which have broad spectrum bacteriostatic activity. Therefore it has good potential for biological control development and prevention.

Key words： Sarcandra glabra; Colletotrichum dematium; antagonistic fungi; antimicrobial activities; biological control

0 引言

【研究意义】肿节风[Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai]具有清热凉血、活血消斑、祛风通络等功效（李成仁等，2009），是中国药典的收录品种（国家药典委员会，2015），也是广西重要的传统瑶药品种“七十二风”中重要的风药品种之一（庞声航，2008）。在肿节风大规模种植过程中易发生由半知菌类炭疽属黑线炭疽菌（Colletotrichum dematium）侵染所致的叶部病害，该病害在广西靖西、融安和东兰等县（市）大面积蔓延，平均发生率在50%以上，在融安县的林下套种模式中发病率高达65%（蒋妮等，2012）。化学防治是目前控制肿节风炭疽病的主要方法，但化学药剂防治极易导致病原菌产生抗耐药性、病害易复发及农药残留等问题（蒋妮等，2014）。利用生防菌防治植物病害，因具有对环境安全的优点，已成为防治植物病害的重要方法之一，是目前国内外研究热点，也是未来绿色中药材发展的趋势。【前人研究进展】近年来，研究者从不同药用植物的根系土壤中分离到多种真菌，并筛选出能产生抑菌防病活性物质的真菌，如从姜黄（Curcuma longa）中分离得到的茎点霉菌（Phoma herbarum）内生真菌对叶部病害致病菌具有拮抗作用（Gupta et al.，2016）;从人参根际土壤中分离到的镰刀菌属（Fusarium sp. PN8）和曲霉属（Aspergillus sp. PN17）真菌已应用于人参皂苷等成分的发酵制备（Jin et al.，2017）;从印度芳香植物柠檬马薄荷（Monarda citriodora）中分离得到的镰刀菌、黄曲霉和Muscodor等具有较强的抗菌活性，显示出良好的应用前景（Ktoch and Pull，2017）;从印度药用植物黄花稔（Sida acuta）中分离得到的具有拮抗活性的硫色曲霉（Aspergillus sulphureus）可抑制大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和伤寒杆菌（Murali et al.，2017）;从光果甘草中分离得到的腐皮镰刀菌（Fusarium solani）具有抗结核的作用（Shah et al.，2017）。针对肿节风炭疽病的防治，蒋妮等（2014）的研究结果表明，戊唑醇、苯醚·咪鲜胺、咪鲜胺和苯醚甲环唑4种药剂对由黑线炭疽引起的肿节风炭疽病田间防效均在70%以上;宋利沙和蒋妮（2018）、宋利沙等（2018）分别从广西药用植物园科研基地土壤中分离获得的棘孢木霉（Trichoderma asperellum）和甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）对肿节风炭疽病菌有较好的抑制作用。【本研究切入点】目前利用有益微生物防治植物病害的研究已有较多报道，而生物防治在中药材肿节风炭疽病上的研究报道较少，尤其是在病害盛行的广西靖西市和都安县尚未进行拮抗真菌的筛选研究。【拟解决的关键问题】采用平板稀释和平板对峙法，从肿节风主产区广西靖西市和都安县健康肿节风根系土壤中筛选出对肿节风炭疽病菌及14种其他植物病原真菌具有较强抑制作用的真菌，利用ELISA试剂盒对较强拮抗菌株进行产酶能力测定，并基于形态学和分子生物学特征对强拮抗菌株进行鉴定，以期为肿节风炭疽病的生物防治提供科学依据。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

1. 1. 1 供试病原菌 肿节风炭疽病菌为黑线炭疽菌（Colletotrichum dematium），编号Z1，由广西药用植物园植物病理研究室分离鉴定保存。供试14种病原真菌包括三七灰霉病菌（Botrytis sp.）、三七黑斑病菌（Alternaria panax）、三七炭疽病菌（Colltetorrichum gloeosporioides）、三七根腐病菌（Fusarium solani）、豆蔻叶斑病菌（Phyllosticta sp.）、苦玄参叶斑病菌（Alternaria sp.）、艾纳香褐斑病菌（Phoma sp.）、罗汉果叶斑病菌（Stagonosporopsis cucurbitacearum）和广西莪术叶斑病菌（Phomopsis sp.）9种药用植物病原真菌及香蕉炭疽病菌（Colltetorrichum sp.）、香蕉枯萎病菌（F. oxysporum）、香蕉叶斑病菌（Alternaria sp.）、西瓜枯萎病菌（F. oxysporum）和烟草灰霉病菌（Botrytis cinerea）5种农作物病原真菌，均由广西药用植物园植物病理研究室提供。

1. 1. 2 样品采集 在广西都安县和靖西市，采用五点取样法采集不同肿节风种植区健康植株的根系土壤，取样时用无菌小毛刷刷取植株根上的土壤，每5株的根系土壤均匀混合为一个样品，编号并封存于无菌保鲜袋中，置于冰盒，带回实验室晾干、去杂、过筛，48 h内分离真菌。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 根系土壤真菌分离 将采集的健康肿节风根系土壤晾干，分别称重1 g，参照张广志等（2009）、耿海峰等（2010）的方法，采用平板稀释法分离真菌，28 ℃恒温培养3 d。将不同形态的真菌单菌落在PDA培养基上划线纯化和编号，4 ℃冰箱保存备用。

1. 2. 2 拮抗真菌筛选 参考朱宏建等（2012）、张瑾等（2014）的方法，采用平板对峙法进行拮抗真菌筛选。在直徑9 cm的PDA培养基中央接种直径5 mm的肿节风炭疽病菌组织块，在离组织块2 cm处的两侧等距离接种1.2.1中分离得到的土壤真菌，以只接种病原菌的PDA培养基为对照。每处理3次重复。28 ℃恒温培养，7 d后计算菌落生长抑制率，筛选出对肿节风炭疽病菌有拮抗作用的真菌。菌落生长抑制率（%）=（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径×100。

1. 2. 3 拮抗真菌抗菌谱测定 对1.2.2中菌落生长抑制率>80.00%的拮抗真菌进行抗菌谱测定。测定方法同1.2.2。

1. 2. 4 拮抗真菌产酶能力测定 综合拮抗真菌平板对峙培养和抑菌谱测定结果，选取综合表现较好的拮抗菌株，进一步测定拮抗菌的几丁质酶、纤维素酶和蛋白酶含量。挑取拮抗菌株单菌落接种于50 mL的PDB培养液中，28 ℃下180 r/min恒温振荡发酵培养7 d，发酵液用无菌纱布和滤纸过滤后，10000 r/min离心15 min，取上清液，经0.22 μm滤膜过滤，得到无菌发酵液。用ELISA试剂盒（AndyGene生物技术有限公司）测定无菌发酵液中的蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶含量，方法参见试剂盒说明书。

1. 2. 5 拮抗真菌鉴定

1. 2. 5. 1 形态鉴定 将综合表现最好的拮抗真菌接种在PDA培养基上培养7～15 d，记录菌落形态（方中达，1998）;在光学显微镜下观察并记录其分生孢子和子实体结构的形态特征，对照《真菌鉴定手册》（魏景超，1979）进行初步鉴定。

1. 2. 5. 2 分子生物学鉴定 采用MightyAmp DNA Polymerase Ver.3（1.25 U/50 μL）（TaKaRa R076A）试剂盒，挑取拮抗真菌的菌落作为模板直接用于PCR扩增。采用真菌ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGC GG-3'）和ITS4（5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'）通用引物，反应体系50.0 μL：2×MightyAmp Buffer（1f）25.0 μL，10×Addtitive for High Specificity（1f）5.0 μL，引物ITS1和ITS2（15 pmoL）各1.5 μL，加ddH2O补足至50.0 μL。扩增程序：98 ℃预变性2 min;98 ℃ 10 s，60 ℃ 15 s，68 ℃60 s，进行40个循环;68 ℃延伸10 min。反应完成后经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，切胶回收目的片段，送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序。利用BLAST程序（https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）将测得序列与GenBank中的序列进行比对。利用MEGA 6.0的Neighbor-Joining法构建ITS rDNA系统发育进化树。

1. 2. 6 拮抗菌株形态观察 光学显微镜下观察拮抗菌株分生孢子的形态特征，拍照并记录。

1. 2. 7 拮抗菌株对炭疽病菌菌丝的抑制生长曲线测定 将直径为5 mm的炭疽病菌菌饼接种至PDA培养基中央，在离菌饼2 cm处的两侧等距离接种拮抗菌单菌落，以只接种炭疽病菌菌饼的PDA培养基为对照。28 ℃恒温培养，培养1、3、5、7、9、11和13 d时测定对照菌落直径和处理菌落直径，每处理3次重复，取平均值绘制抑制生长曲线。

1. 2. 8 拮抗菌株对病菌孢子萌发的影响 将炭疽病菌在PDA培养基上培养7 d，用无菌水冲洗其菌丝体，配制成106个/mL孢子悬浮液。将拮抗菌株的无菌发酵液（制备方法同1.2.4）稀释0、10、50和100倍后，分别与病菌孢子悬浮液以1∶1混合，采用悬滴法（方中达，1998）将混合液加入单凹载玻片中，25 ℃培养48 h后，利用血球计数板统计分生孢子数，以炭疽病菌孢子悬浮液为对照，计算分生孢子萌发抑制率。孢子萌发率（%）=孢子萌发的数量/总孢子数量×100;孢子萌发抑制率（%）=（对照孢子萌发率-处理孢子萌发率）/对照孢子萌发率×100。

1. 3 統计分析

试验数据采用SPSS 19.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA），选用LSD和Duncan’s新复极差法进行组间的多重比较。

2 结果与分析

2. 1 拮抗真菌的分离与筛选结果

从肿节风健康植株的根系土壤中共分离得到23株真菌，其中来源于靖西13株、都安10株。抑制率<50.00%的有12株;抑制率为50.00%～80.00%的有8株;抑制率>80.00%的有3株，分别为JT-8、JT-3和DT-5，其中菌株JT-8对炭疽病菌的拮抗作用最明显，抑制率达91.57%，菌株DT-5的抑制率最低，为80.72%，但三者对炭疽病菌的抑制率间无显著差异（P>0.05，下同）（表1，图1）。

2. 2 拮抗菌株JT-8、JT-3和DT-5的抑菌谱分析结果

由表2可知，菌株JT-8、JT-3和DT-5对14种病原真菌的平均抑制率分别为89.88%、88.65%和82.85%，其中菌株JT-8对香蕉叶斑病、香蕉炭疽病、罗汉果叶斑病、三七黑斑病、三七炭疽病、三七根腐病、艾纳香褐斑病和苦玄参叶斑病病原菌均具有较强的抑制作用，抑制率均达90.00%以上，对其余供试病原真菌的抑制率也在80.00%以上，对14种病原真菌的抑制率差异不显著;菌株JT-3对香蕉叶斑病、香蕉炭疽病、艾纳香褐斑病、西瓜枯萎病、苦玄参叶斑病、三七黑斑病和三七根腐病病原菌均具有较强的抑制作用，抑制率均达90.00%以上，对广西莪术叶斑病病原菌的抑制作用最弱，抑制率为74.31%;菌株DT-5对香蕉叶斑病、罗汉果叶斑病、三七炭疽病和三七根腐病病原菌均具有较强的抑制作用，抑制率均达90.00%以上，对豆蔻叶斑病病原菌的抑制作用较差，抑制率只有47.06%，显著低于除对香蕉枯萎病外的其他病原菌的抑制率（P<0.05，下同）。综上所述，3种拮抗真菌中以菌株JT-8的抑菌谱最广。

2. 3 拮抗真菌产酶能力测定结果

取菌株JT-8、DT-5和JT-3的无菌发酵液检测蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶含量，结果（表3）表明，3种拮抗真菌的蛋白酶含量排序为JT-3>JT-8>DT-5;纤维素酶含量排序为JT-8>JT-3>DT-5;几丁质酶含量排序为JT-8>JT-3>DT-5。蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶是真菌细胞壁主要的水解酶（孙虎等，2011;刘爱荣等，2012），推测3株拮抗真菌可通过产生细胞壁水解酶对致病菌产生抑制作用。综合考虑3株菌株与病原菌平板对峙培养结果、抑菌谱及代谢产物中细胞壁水解酶含量，选取综合效果最佳的菌株JT-8进一步研究。

2. 4 拮抗菌株JT-8鉴定结果

2. 4. 1 形态鉴定 菌株JT-8在PDA培养基上初期菌落呈白色，后期呈紫色;菌丝生长缓慢，分生孢子圆形，大小为（1.4～2.5）μm×（1.2～2.6）μm，无色，分生孢子梗直立，顶端存在一次或多次扫帚状分枝，分枝顶端产生瓶状小梗，其上着生成串的分生孢子（图2）。

2. 4. 2 分子生物学鉴定 对拮抗菌株JT-8的ITS rDNA序列进行测定并构建系统发育进化树，结果（图3）显示，菌株JT-8与Purpureocillium lilacinum （KC790527和KX641490）聚在同一分支，相似度达100%。因此，将JT-8鉴定为淡紫紫孢菌（P. lilacinum）。将菌株JT-8的ITS rDNA序列提交至GenBank数据库，获得的登录号为MK377152。

2. 5 拮抗菌株JT-8的作用机理

2. 5. 1 拮抗菌株JT-8对炭疽病菌菌丝形态的影响

分别挑取1.2.2中对照组和处理组（与菌株JT-8对峙培养）的炭疽病菌菌丝在光学显微镜下观察，发现处理组的菌丝体畸形，菌丝体扭曲、断裂、分支缠绕，部分菌丝颜色深，菌丝体膨大，透明度增加，分生孢子梗畸变，孢子数量明显减少（图4）。

2. 5. 2 拮抗菌株JT-8发酵液对病原菌孢子萌发的影响 由表4可知，随着菌株JT-8发酵滤液稀释倍数的增加，对炭疽菌孢子萌发的抑制率越低，其中以原液对病原菌孢子萌发的抑制率最高，达94.88%，显著高于除10倍稀释液外的其他处理，对应的炭疽菌孢子不萌发;对照的病原菌孢子萌发率最高，达94.88%，显著高于菌株JT-8发酵液处理;10～100倍稀释液处理对病原菌孢子萌发的抑制率为73.41%～89.41%，对应的炭疽菌孢子萌发率为10.05%～25.23%，各处理间孢子萌发率差异显著。结果表明，拮抗菌株JT-8发酵滤液原液对肿节风炭疽病菌孢子萌发的抑制作用最强，其次是10和50倍稀释液，100倍稀释液的抑制作用最弱。

2. 5. 3 拮抗菌株JT-8对炭疽病菌菌丝的抑制生长曲线 由图5可看出，对照组炭疽病菌菌落直径随着培养时间的延长而增加，最终长满整个平板（9.0 cm）;在培养初期，处理组炭疽病菌菌落直径随着培养时间的延长而增加，至5 d后菌落不再生长，菌落直径仅为3.5 cm。表明拮抗菌株JT-8对肿节风炭疽病菌具有明显的抑制作用。

3 讨论

淡紫紫孢菌原名淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）（Luangsaard et al.，2011），原属于拟青霉属，现独立为一个新属，是一种土壤习居性植物线虫卵寄生真菌，产孢量大，具有抑菌防病防虫等功能，且具有抑菌广谱性，对开发生物农药和制剂具有潜在的应用价值。本研究从炭疽病盛行的肿节风主产区广西靖西市和都安县健康肿节风根系土壤中筛选出具有强拮抗活性的菌株JT-8，经形态观察和ITS鉴定为淡紫紫孢菌，该菌对肿节风炭疽病菌和14种其他植物病害致病菌均具有较强的抑制作用，与郝泽婷等（2018）、肖支叶等（2018）、袁和奇等（2018）的研究结果一致。此外，淡紫紫孢菌对植物寄生线虫、蚜虫、红蜘蛛、温室粉虱、柑橘木虱和切叶蚁等也有很好的防治作用;同时，淡紫拟青霉对动物寄生虫、人畜共患寄生虫等均有防治效果（张家家等，2014;杨波等，2016;上官亦卿等，2018;杨凡等，2018）。杜丹超等（2015）从柑橘木虱中分离出一株对柑橘木虱具有强致病性的菌株ZJPL08，经鉴定菌株ZJPL08为淡紫紫孢菌;在ZJPL08孢子悬浮液相同浓度条件下，接种后培养时间越长，柑橘木虱的死亡率越高;培养时间相同的条件下，ZJPL08孢子悬浮液浓度越高，柑橘木虱的死亡率越高。至于本研究筛选出的菌株JT-8对植物害虫的防治效果如何还有待进一步研究证实。

本研究对淡紫紫孢菌的产酶能力进行测定，发现可产生几丁质酶、纤维素酶和蛋白酶类抗菌活性物质，这些活性物质均属于抗菌肽，可单独或与细胞壁降解酶协同抑制病原菌的生长（孙虎等，2011;刘爱荣等，2012;王婧等，2018）。淡紫紫孢菌产生的几丁质酶和丝氨酸蛋白酶能降解线虫表皮的蛋白质和几丁质组成成分，利于侵入并破坏细胞成分;淡紫紫孢菌可内生于植物，产生效应物对其他真菌产生拮抗作用;淡紫紫孢菌可定殖于植物根际，产生次级代谢产物，对真菌、線虫等产生抑杀作用（孙虎等，2011）。细胞壁溶解酶是一种复合型的水解酶，可水解真菌的细胞壁，抑制病原菌生长，达到抗菌防病的目的。本研究在室内测定了分离筛选到的淡紫紫孢菌对病原菌的拮抗作用、抗菌活性物质种类及含量，其在田间的防病效果如何还需进一步通过田间试验验证。

4 结论

淡紫紫孢菌对肿节风炭疽病病原菌具有强拮抗作用，能产生多种抗菌活性物质，且广谱抑菌，具有较好的生防开发潜能。

参考文献：

杜丹超，鹿连明，胡秀荣，黄振东，张利平，陈国庆. 2015. 淡紫紫孢菌菌株的分离、鉴定及其对柑橘木虱的致病性[J]. 浙江农业学报，27（3）： 393-399. [Du D C，Lu L M，Hu X R，Huang Z D，Zhang L P，Chen G Q. 2015. Isolation and identification of Purpureocillium lilacinum and its pathogenicity against Diaphorina citri[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis，27（3）： 393-399.]

方中达. 1998. 植病研究方法[M]. 北京： 中国农业出版社： 132-134. [Fang Z D. 1998. Research methods on plant diseases[M]. Beijing： China Agriculture Press：132-134.]

耿海峰，张丽珍，牛伟. 2010. 冬枣采后病害拮抗菌的筛选和鉴定[J]. 食品科学，31（9）：150-155. [Geng H F，Zhang L Z，Niu W. 2010. Screening and identification of antagonistic bacteria against post-harvest disease of jujube fruits[J]. Food Science，31（9）： 150-155.]

国家药典委员会. 2015. 中华人民共和国药典一部[M]. 北京： 中国医药科技出版社： 223-224. [China Pharmacopoeia Committee. 2015. Chinese pharmacopoeia，the first part[M]. Beijing：China Medicine Science and Technology Press： 223-224.]

郝泽婷，郝晓慧，阎婧，谢丙炎，梁丽琴. 2018. 淡紫拟青霉次级代谢产物的研究进展[J]. 生物技术通报，34（10）： 11-17. [Hao Z T，Hao X H，Yan J，Xie B Y，Liang L Q. 2018. Research progress on the secondary metabolite of Purpureocillium lilacinum[J]. Biotechnology Bulletin，34（10）：11-17.]

蒋妮，唐美琼，蓝祖栽，黄永才，林杨，白隆华. 2012. 肿节风炭疽病病原学研究及其对药材质量的影响[J]. 植物保护，38（4）： 83-88. [Jiang N，Tang M Q，Lan Z Z，Huang Y C，Lin Y，Bai L H. 2012. Influences of anthracnose on the quality of Sarcandra glabra and pathogen identification[J]. Plant Protection，38（4）： 83-88.]

蒋妮，叶云峰，胡凤云，刘丽辉，刘威. 2014. 防治肿节风黑线炭疽病菌的药剂筛选[J]. 热带生物学报，5（3）： 244-259. [Jiang N，Ye Y F，Hu F Y，Liu L H，Liu W. 2014. Screening of efficient fungicides against the anthracnose of Sarcandra glabra caused by Colletotrichum dematium[J]. Journal of Tropical Biology，5（3）： 244-259.]

李成仁，王园园，李小艳，宋晓红，韦琪生，蒋林，叶创兴. 2009. 肿节风药材采收部位与最佳采收期的研究[J]. 时珍国医国药，20（3）： 586-588. [Li C R，Wang Y Y，Li X Y，Song X H，Wei Q S，Jiang L，Ye C X. 2009. Study on different parts and optimal harvest season of herba Sarcandrae[J]. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，20（3）： 586-588.]

刘爱荣，陈双臣，晋文娟，于贝贝，王凤华，贺超兴. 2012. 哈茨木霉对接种尖孢镰刀菌后黄瓜根系次生代谢产物的影响[J]. 中国生物防治学报，28（4）： 545-551. [Liu A R，Chen S C，Jin W J，Yu B B，Wang F H，He C X. 2012. Effects of Trichoderma harzianum on secondary metabolites in cucumber roots infected with Fusarium oxysporum[J]. Chinese Journal of Biological Control， 28（4）： 545-551.]

庞声航. 2008. 实用瑶药学[M]. 南宁： 广西科学技术出版社： 63. [Pang S H. 2008. Practical yao pharmacy[M]. Nanning： Guangxi Science and Technology Press： 63.]

上官亦卿，賈凤安，常帆，吕睿，王艳，李燕，丁浩. 2018. 淡紫拟青霉（Purpureocillium lilacinum）及其对病虫害生防效果和机制研究进展[J]. 陕西农业科学，64（9）： 81-88. [Shangguan Y Q，Jia F A，Chang F，Lü R，Wang Y，Li Y，Ding H. 2018. Purpureocillium lilacinum and its biocontrol efficacy and mechanism against pests and diseases[J]. Shaanxi Journal of Agricultural Sciences，64（9）： 81-88.]

宋利沙，蒋妮. 2018. 肿节风黑斑病拮抗真菌zjts7的抑菌作用测定与鉴定[J]. 中国现代中药，20（11）： 1392-1395. [Song L S，Jiang N. 2018. Antifungal effect and identification of biocontrol fungus zjts7 against Colletotrichum dematium of Sarcandra glabra[J]. Modern Chinese Me-dicine，20（11）： 1392-1395.]

宋利沙，蒋妮，缪剑华，蓝祖栽. 2018. 肿节风炭疽病拮抗细菌的筛选与鉴定[J]. 植物保护，44（6）：61-65. [Song L S，Jiang N，Miao J H，Lan Z Z. 2018. Screening and identification of bacteria antagonistic to Colletotrichum dema-tium of Sarcandra glabra[J]. Plant Protection，44（6）： 61-65.]

孙虎，杨丽荣，全鑫，薛保国，朱自贤，武超. 2011. 木霉生防机制及应用的研究进展[J]. 中国农学通报，27（3）： 242-246. [Sun H，Yang L R，Quan X，Xue B G，Zhu Z X，Wu C. 2011. Research advances on mechanism of biological control and application about Trichoderma spp.[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，27（3）： 242-246.]

王婧，刁小龙，陈晓兰，王帅兵，陈海峰，张龙. 2018. 抗菌肽Indolicidin的研究进展[J]. 江苏农业学报，34（4）：949-954. [Wang J，Diao X L，Chen X L，Wang S B，Chen H F，Zhang L. 2018. Research progress of antibacteial peptides Indolicidin[J]. Jiangsu Journal of Agricultural Scien-ces，34（4）：949-954.]

魏景超. 1979. 真菌鉴定手册[M]. 上海： 上海科学技术出版社. [Wei J C. 1979. Fungal identification manual[M]. Shanghai： Shanghai Scientific and Technical Publishers.]

肖支叶，华梅，原晓龙，邱坚，郑科，王毅. 2018. 蒜头果内生真菌次生代谢产物抑制人类致病菌活性的研究[J]. 广西植物，38（7）：903-910. [Xiao Z Y，Hua M，Yuan X L，Qiu J，Zheng K，Wang Y. 2018. Activity inhibition of human pathogenic bacteria by secondary metabolites from Malania oleifera endophytic fungi[J]. Guihaia，38（7）： 903-910.]

楊波，孟俊峰，莫陈汨，王娜，王高峰，彭德良，肖炎农，肖雪琼. 2016. 生防菌淡紫紫孢菌与低剂量杀线虫剂复配防治蔬菜根结线虫的研究[J]. 植物病理学报，46（4）： 551-560. [Yang B，Meng J F，Mo C G，Wang N，Wang G F，Peng D L，Xiao Y N，Xiao X Q. 2016. Combination of biocontrol agent Purpureocillium lilacinum and lowdose nematicides for integrated control of vegetable root-knot nematodes[J]. Acta Phytopathologica Sinica，46（4）：551-560.]

杨凡，蔡毓新，贾文华，甄熙，唐艳领，史宣杰. 2018. 淡紫紫孢菌对黄瓜根结线虫的防治效果[J]. 中国瓜菜，31（7）： 35-38. [Yang F，Cai Y X，Jia W H，Zhen X，Tang Y L，Shi X J. 2018. The control effect of Purpureocillium lilacinum on the root knot nematode of cucumber[J]. China Cucurbits and Vegetables，31（7）： 35-38.]

袁和奇，徐鹏程，肖海艳，张臻，赵娟，王高峰，肖雪琼，肖炎农. 2018. 淡紫紫孢菌防治采后番茄果实灰霉病[J]. 中国生物防治学报，33（4）： 525-530. [Yuan H Q，Xu P C，Xiao H Y，Zhang Z，Zhao J，Wang G F，Xiao X Q，Xiao Y N. 2018. Efficacy of Purpureocillium lilacinus on gray mold of post-harvest tomato fruits[J]. Chinese Journal of Biological Control，33（4）： 525-530.]

张广志，杨合同，李纪顺，扈进冬. 2009. 多功能芽孢杆菌的分离、筛选及活性测定[J]. 江苏农业科学，（1）： 298-300. [Zhang G Z，Yang H T，Li J S，Hu J D. 2009. Isolation，screening and activity determination of multifunctional Bacillus subtilis[J]. Jiangsu Agricultural Sciences，（1）： 298-300.]

张家家，李世东，郭荣君，彭毅，孙漫红，缪作清. 2014. 淡紫紫孢菌YES和粉红螺旋聚孢霉67-1组合对黄瓜根结线虫病的防效评价[J]. 中国生物防治学报，30（6）：787-794. [Zhang J J，Li S D，Guo R J，Peng Y，Sun M H，Miao Z Q. 2014. Efficacy of combined use of Purpureocillium lilacinum YES and Clonostachys rosea 67-1 in suppre-ssing cucumber root-knot disease caused by Meloidogyne incognita[J]. Chinese Journal of Biological Control，30（6）： 787-794.]

张瑾，张树武，徐秉良，古丽君，薛应钰. 2014. 长枝木霉菌抑菌谱测定及其抑菌作用机理研究[J]. 中国生态农业学报，22（6）： 661-667. [Zhang J，Zhang S W，Xu B L，Gu L J，Xue Y Y. 2014. Determining antifungal spectrum and mechanim of Trichoderma longibrachiatum in vitro[J]. Chinese Journal of Eco-Agriculture，22（6）：661-667.]

朱宏建，欧阳小燕，周倩，高必达. 2012. 一株辣椒尖孢炭疽病菌拮抗菌株的分离鉴定与发酵条件优化[J]. 植物病理学报，42（4）： 418-424. [Zhu H J，Ouyang X Y，Zhou Q，Gao B D. 2012. Isolation，identification and optimizing fermentation conditions of an antagonistic strain against Colletotrichum acutata[J]. Acta Phytopathologica Sinica，42（4）： 418-424.]

Gupta S，Kaul S，Singh B，Vishwakarma R A，Dhar M K. 2016. Production of gentisyl alcohol from Phoma herbarum endophytic in Curcuma longa L. and its antagonistic activity towards leaf spot pathogen Colletotrichum gloeosporioides[J]. Applied Biochemistry and Biotechno-logy，180（6）： 1093-1109.

Jin Z X，Gao L，Zhang L，Liu T Y，Yu F，Zhang Z S，Guo Q，Wang B Y. 2017. Antimicrobial activity of saponins produced by two novel endophytic fungi from Panax notoginseng[J]. Natural Product Research，31（22）： 2700-2703.

Ktoch M，Pull S. 2017. Endophytic fungi associated with Monarda citriodora，an aromatic and medicinal plant and their biocontrol potential[J]. Pharmaceutical Biology，55（1）： 1528-1535.

Luangsaard J，Houbraken J，Doorn T V，Hong S B，Borman A M，Hywel-Jones N L，Samson R A. 2011. Purpureocillium，a new genus for the medically important Paecilomyces lilacinus[J]. FEMS Microbiology Letters，321（2）： 141-149.

Murali M，Mahendra C，Hema P，Rajashekar N，Nataraju A，Sudarshana M S，Amruthesh K N. 2017. Molecular profiling and bioactive potential of an endophytic fungus Aspergillus sulphureus isolated from Sida acuta： A medicinal plant[J]. Pharmaceutical Biology，55（1）： 1623-1630.

Shah A，Rather M A，Hassan Q P，Aga M A，Mushtaq S，Shah A M，Hussain A，Baba S A，Ahmad Z. 2017. Discovery of anti-microbial and anti-tubercular molecules from Fusarium solani： An endophyte of Glycyrrhiza glabra[J]. Journal of Applied Microbiology，122（5）： 1168-1176.

（責任编辑 麻小燕）