白僵菌多糖对肿瘤细胞及免疫细胞作用的研究

2019-09-06宋志强丁祥朱淼唐贤侯怡铃

现代农业科技 2019年7期

关键词：多糖

宋志强　丁祥　朱淼　唐贤　侯怡铃

摘要本文通过使用酶标仪检测白僵菌多糖刺激B淋巴细胞和小鼠结肠癌细胞CT26.WT后分别得到的OD值，对白僵菌多糖在机体免疫活性和抗肿瘤方面的作用进行研究。结果表明，用不同浓度的白僵局多糖刺激B淋巴细胞时，细胞数量增加，成团量变大;用不同浓度的白僵菌多糖刺激CT26.WT细胞时，细胞数量减少或有被抑制的趋势。由此说明，白僵菌多糖能够促进B细胞的增殖，抑制CT26.WT细胞的生长。

关键词白僵菌;多糖;B淋巴细胞;CT26.WT细胞

中图分类号 R285.5

文献标识码 A

文章编号 1007-5739（2019）07-0187-02

白僵菌（Beauweria bassiana）是一種病原真菌类的虫生真菌，具有较强的抗虫害作用，并且容易人工培养，主要用于害虫的防治16。真菌多糖是真菌中的有效生物活性成分，能够增强机体的免疫功能，并在抗肿瘤方面发挥出一定的积极作用17-8。

目前，对于白僵菌多糖的报道仅见于芽生孢子内的糖原及其代谢的检测，然而与白僵菌多糖对免疫活性的调节和抗肿瘤作用相关的研究尚未见报道%。本试验通过使用不同质量浓度的白僵菌多糖溶液分别刺激B淋巴细胞和小鼠结肠癌细胞CT26.WT，并结合酶标仪检测白僵菌多糖对B淋巴细胞和小鼠结肠癌细胞CT26.WT的影响，为进一步研究白僵菌多糖对机体免疫功能和抗肿瘤功能的影响提供了理论依据。

1材料与方法

1.1主要材料与仪器

1.1.1试验材料。白僵菌（保存于西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护省部共建教育部重点实验室）;B淋巴细胞、小鼠结肠癌细胞（CT26.WT）（中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所）;96孔板、25cm2细胞培养瓶[康宁生命科学（吴江）有限公司]。

1.1.2药品试剂。RPMI1640培养基、胰蛋白酶（美国Gibeo公司）;脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，上海源叶生物科技有限公司）;CCK-8试剂盒（cell counting kit-8，上海博升生物科技有限公司）;PBS缓冲液。

1.1.3主要仪器。Epoch酶标仪（美国基因有限公司）;SE-CJ-1F型超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）;3100系列CO2恒温培养箱（美国Thermo公司）;LD4-2A型离心机、BCD-208K/A型-80C冰箱（青岛海尔股份有限公司）;HHS型水浴锅（上海光地仪器设备有限公司）;Eppendorf移液枪[艾本德（上海）国际贸易有限公司]。

1.2试验方法

1.2.1溶液的配制。配制质量浓度为1mg/mL的白僵菌多糖母液并加入细胞培养液稀释，配制成质量浓度为1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、30.00μg/mL的白僵菌多糖溶液。配制质量浓度为1mg/mL的LPS母液并加入细胞培养液稀释，配制成质量浓度为10μg/mL的LPS溶液。

1.2.2B淋巴细胞、CT26.WT细胞的培养。用培养液将B淋巴细胞和CT26.WT细胞稀释至2x10%细胞/mL，配制成细胞悬浮液。向96孔板样品孔四周加入PBS缓冲液，其余孔中分别加人细胞悬浮液。试验设置为空白对照组、LPS阳性对照组（终质量浓度5μg/mL）和白僵菌多糖试验组（终质量浓度0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、15.000μg/mL），在37C、5%的二氧化碳培养箱中培养24h。

1.2.3白僵菌多糖刺激B淋巴细胞CT26.WT细胞。向96孔板的空白对照组、试验组（终质量浓度为0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、15.000μg/mL）和LPS阳性对照组（终质量浓度为5μg/mL）中分别加入细胞培养液和质量浓度为1.25、2.50.5.00、10.00、20.00、30.00μg/mL的白僵菌多糖溶液以及质量浓度为10μg/mL的LPS溶液，每个浓度梯度设置6个重复。充分混匀后放在37C、5%的二氧化碳培养箱中恒温培养24h。

1.2.4酶标仪检测。将培养24h后的细胞从恒温培养箱中取出，并分别取5μLCCK-8试剂加入96孔板内，在37C、5%的二氧化碳培养箱中孵育3h，再用酶标仪在450nm的激发波长下检测OD值并记录作图。

2结果与分析

2.1白僵菌多糖对B细胞的增殖作用

由图1可知，当白僵菌多糖的终质量浓度为0.625～15.000μg/mL时，能够明显看出B细胞呈现增殖状态。当终质量浓度为5μg/mL，促进B细胞增殖的效果最好，相比于空白对照组具有极显著性差异（P<0.01）。

B淋巴细胞增殖形态如图2所示，从图中可以看出，具有良好生长状态的B细胞加入白僵菌多糖刺激后，B细胞成团量变大，增殖能力逐渐增强，并且当用5μg/mL浓度的白僵菌多糖刺激B细胞时，B细胞的成团量最大且增殖效果最好。

2.2白僵菌多糖对CT26.WT细胞的抑制作用

由图3可知，当白僵菌多糖的终质量浓度为0.625～15.000μg/mL时，能够明显看出小鼠结肠癌细胞CT26.WT的生长被抑制了。当终质量浓度为2.500μg/mL时，抑制CT26.WT细胞增殖的效果最好，相比于空白对照组具有极显著性差异（P<0.01）。

3结论

B淋巴细胞作为人体免疫重要的一道防线，可正向调节各种免疫成分和机体的免疫反应，对机体的免疫活性调节发挥作用10-1。CT26.WT细胞则是以N-nitroso-N-methylu-rethane-（NMU）诱导BALB/C小鼠形成的未分化结肠癌细胞，CT26.WT细胞具有极强的侵袭性，对机体免疫会产生较大的危害13。

由试验结果可知，白僵菌多糖在0.625～15.000μg/mL的浓度范围内，均能够促进B淋巴细胞增殖，且增殖效应与白僵菌多糖的质量浓度成正相关。浓度为0.625～5.000μg/mL的白僵菌多糖试验组与空白对照组相比具有极显著性差异（P<0.01）。

白僵菌多糖在0.625～15.000μg/mL的浓度范围内，均能够抑制CT26.WT细胞增殖和生长，且抑制效应与白僵菌多糖的质量浓度成正相关。浓度为2.5μg/mL的白僵菌多糖试验组与空白对照组相比具有极显著性差异（P<0.01）。

综上所述，在体外试验中一定浓度的白僵菌多糖能够促进B淋巴细胞增殖，抑制CT26.WT细胞增殖，进而达到保护机体的作用，但涉及的相关免疫机制、肿瘤机制及分子信号通路还有待进一步验证。

4参考文献

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