谭海东 夏红兵 张冠群 王海霞 白会新 王连英 翟宝库*

（1黑龙江省大庆市动物疫病预防与控制中心，黑龙江大庆 163311；2黑龙江省大庆高新区东风农场，黑龙江大庆163311；3黑龙江省大庆市畜牧技术推广站，黑龙江大庆 163311）

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV）引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，口蹄疫病毒有7个血清型[1]。口蹄疫是危害猪只健康、影响养猪业发展的重大疫病之一，也是影响食品安全的重大疫病之一，呈全球分布，国际动物卫生组织（OIE）将其列为A类疫病，我国将其列为一类疫病。目前只有少数发达国家已消灭口蹄疫，达到不实施免疫的无疫情状态，多数发展中国家仍呈地方性流行或散发之势。近年来，我国周边国家的猪口蹄疫疫情不断，国内疫情呈非季节性散发，时高时低，严重威胁区域畜牧业发展，尤其是口蹄疫病毒新毒株的出现和流行，使疫病防控更趋复杂。

为了解黑龙江省大庆市不同区域猪O型口蹄疫疫情的流行态势，本文对不同养殖方式防控差异及区域整体防控效果进行监测分析，选出更加优化的排查和防控疫情的方法，确保免疫密度和质量，消除防控隐患。针对2016—2018年大庆市不同地域、不同时段、不同群体、不同饲养方式采集的2 464份血清样品，以及在屠宰场和病猪场采集的278份猪淋巴结样品，应用RT-PCR和非结构蛋白ELISA方法进行病原检测，液相阻断ELISA方法进行免疫抗体检测。分析猪群口蹄疫流行动态和整体防疫效果，为区域疫情预警、免疫防疫提供支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源

被检动物血清样品来源于大庆市不同区域的规模猪场、散养户和屠宰场，共2 464份；淋巴结样品来源于屠宰场和病猪场，共278份。

1.1.2 疫苗及检测试剂

采样猪场所用猪O型口蹄疫疫苗均来自政府采购。主要检测试剂有：口蹄疫病毒通用型检测试剂盒（RT-PCR法）、口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒和口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒，以上检测试剂均是政府采购。

1.2 方法

1.2.1 样品采集及制备

随机采集规模猪场、散养户和屠宰场内猪的血清样品，每头猪采血1～2 mL，4℃放置1～2 h，3 000 r/min离心10 min， 分离血清，- 20℃保存备用。随机采集屠宰场和病猪场的猪淋巴结样品，- 20℃保存备用。

1.2.2 检测方法

按所购检测试剂盒说明书的方法进行操作和判断。

2 结果

2.1 实时荧光PCR法 （RT-PCR）检测结果

屠宰场和病猪场的278份淋巴结样品，经RT-PCR检测结果全部阴性（部分检测结果见图1）。表明大庆市对猪O型口蹄疫的防控效果良好，没有发生过该疫情。

2.2 口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测结果

按地理位置和养殖形式，将大庆市划分为两肇区（肇州县和肇源县）、林杜区（林甸县和杜尔伯特蒙古族自治县）、红大区（红岗区和大同区）及市中心区4个区域。2016—2018年共抽检746份血清样品，非结构蛋白抗体检测结果全部阴性，表明目前大庆市没有猪口蹄疫疫情发生（表1）。

图1 口蹄疫病毒实时荧光PCR扩增结果

表1 猪口蹄疫非结构蛋白抗体检测结果

2.3 免疫抗体检测结果

2.3.1 不同年份猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

2016—2018年连续3年共检测猪血清样品2 464份，猪O型口蹄疫免疫抗体合格率在74.26%～82.70%之间，均超过农业主管部门要求的70%最低临界点，按年份比较，抗体合格率逐年递增（表2）。

表2 不同年份猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

2.3.2 不同地区猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

2016—2018年所检测的2 464份血清样品中，按区域分红大区抗体合格率为77.11%、林杜区抗体合格率为78.78%、两肇区抗体合格率为81.13%、中心区抗体合格率为78.20%（表3）。以上抗体合格率均大于70%的抗体合格临界点，两肇区抗体合格率最高，红大区最低，但区域间差异不显著（＞0.05）。

表3 不同地区猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

2.3.3 不同来源猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

2016—2018年的2 464份血清样品中，按照血清来源检测发现，规模场的猪O型口蹄疫疫苗抗体合格率为84.89%、散养户猪血清的抗体合格率为76.54%、屠宰场猪血清的抗体合格率为68.42%（表4）。由此可知，规模场猪的抗体合格率最好、散养户次之、屠宰场较差。屠宰场猪血清的抗体合格率已低于70%临界点，说明屠宰前的猪群抗体保护不合格。

表4 不同来源猪O型口蹄疫免疫抗体检测结果

3 讨论

口蹄疫是威胁养殖业发展的多种动物共同感染的烈性疫病，宿主较为广泛。目前我国采取强制监测和强制免疫方式防控。按农业农村部要求，各级动物疫病控制单位按月进行日常监测，每年春秋2季进行集中监测，评估疫情流行动态和免疫保护效率，提高预警、预报能力。在各级政府和业务部门的共同努力下，我国口蹄疫疫情虽然没有完全净化，却也没有造成地方性流行，始终处在点式散发状态，年发病率忽高忽低，不同程度威胁区域畜牧业生产。据农业农村部网站公布的数据统计，2010年6月21日至2019年4月2日全国共发生口蹄疫疫情96起，其中O型口蹄疫71起，占73.96%，其中猪疫情31起，占43.66%。在全国疫情中，口蹄疫疫情多发于西北、西南地区，东北地区发生疫情较少，仅2012年辽宁大连发生1起，2019年内蒙古赤峰发生1起。2010年6月21日至今我国发生的疫情中，仅2018年就有27起疫情，占近年发生疫情的28.13%，有明显抬头之势。虽然，大庆市近几年的猪O型口蹄疫抗体检测中合格率达标，但受周边国家和国内疫情增加的威胁，以及疫点地理位置的影响，大庆市区域防控压力明显增加，现阶段加大强制监测密度对区域疫情防控及预警有积极意义。

强制免疫是在现有饲养条件、防控技术和国民经济承受能力下，养殖业受到重大动物疫病威胁时国家采取的一种防控举措。动物免疫抗体水平反映的是机体本身抗击同类病原的感染能力，在评价群体动物群内抗感染能力时，免疫抗体合格率是一项重要指标。在确定抗体保护临界标准情况下，免疫合格率越高，动物群内抗感染能力越强，发生疫病风险越低；反之，群内抗感染能力越低，发生疫病风险越高。因此，在现有防控条件下，加强免疫抗体检测，尽早发现免疫抗体合格率低下动物，及时补免，可明显提高免疫抗体合格率，增强群体抗感染能力。

我国规定在猪O型口蹄疫、猪瘟等重大疫病防控中，动物群体的免疫抗体合格率应在70%以上，这样动物群体才能有较好的抗感染能力，绝大部分个体能够抵御同型野毒的攻击，可防止疫病暴发。经多年免疫防控，当前我国绝大多数地区口蹄疫免疫效果较好。据杨国丽等[2]报道，2012—2015年辽宁省猪O型口蹄疫免疫总合格率在84.72%～89.99%之间。孙玉霜等[3]报道2014年天津地区种猪场、规模场和散养户猪O型口蹄疫免疫抗体合格率分别为93.37%、84.89%、82.68%，总合格率为84.97%。黄刚等[4]报道2015年甘肃宁县规模场、散养户和市场猪O型口蹄疫免疫抗体合格率分别为89.50%、81.25%、91.67%，总合格率为87.47%。说明在强制免疫和持续监测下，我国现阶段大部分地区猪O型口蹄疫的免疫抗体合格率已在80%以上，基本保证了绝大多数地区处在免疫无疫情状态，很好地维护了畜牧业生产。本次监测大庆市2016—2018年规模场、散养户和屠宰场抗体合格率分别为84.89%、76.54%、68.42%，总合格率为78.81%。与以上报道相比，总合格率偏低，这主要是个别批次抗体合格率偏低所致，尤其散养户和屠宰场，有的批次抗体合格率仅30%左右，说明在现有技术条件下，大庆市的猪O型口蹄疫防控还需要完善和提升。

据王海军等[5]报道，2014—2015年吉林延边地区部分规模猪场母猪、哺乳仔猪和育肥猪O型口蹄疫免疫抗体合格率分别为72.22%、63.16%和93.44%，总合格率80.34%。与本文监测结果比较，规模猪场母猪和哺乳仔猪的免疫抗体合格率偏低，育肥猪的免疫抗体合格率偏高，总合格率基本一致，说明在我国各地应用现有防控体系中，群内抗体安全保护水平不能平稳维持到一个饲养周期，疫苗保护力存在半衰期，这是现阶段各地存在散发病例的重要因素。因此，猪场在疫苗免疫和抗体监测中，需要关注哺乳期、疫苗免疫前期以及出栏前期几个节点的抗体水平，同时注意加强管理，避免漏免或免疫剂量不足现象的发生。

猪群整个饲养周期的抗体保护水平与母猪免疫、仔猪初免时间和抗体持续期有关。做好母猪免疫，合理确定初免和加强免疫规划，解决程序缺陷是保持群体免疫合格率持续平稳的关键。仔猪哺乳期抗体保护来源于母体，做好母猪免疫可使仔猪获得足够的母源抗体；合理实施母猪免疫，掌握仔猪母源抗体安全保护边界，及时免疫可平稳过渡抗体保护状态。当前，应用的猪O型口蹄疫疫苗，母源抗体对免疫抗体产生影响较小，说明在母源抗体较高的情况下对仔猪进行初免口蹄疫疫苗是可行的，效果也较好，这一结果在另一个试验[6]中得到证实。

免疫效果与疫苗本身有关，猪口蹄疫疫苗已研究多年，生产工艺有了明显改善，疫苗质量显著提高，免疫原性较好，免疫副反应明显降低。据覃勇等[7]报道，猪O型口蹄疫灭活疫苗单次颈部注射免疫，散养村免疫抗体合格率为91.7%。笔者研究团队发现，单次免疫，一般在免疫28天后达到高峰期，抗体合格率为90%～100%，但免疫维持期较短，育肥猪出栏前需加强免疫。以上多数报道的免疫程序是按传统的春秋2季免疫加补免程序，在免疫1个月左右抽样检测，即在高峰期检测，合格率较高。免疫抗体合格率的高低与采样时间有关，按月统计发现免疫合格率呈现递减趋势，出栏前期免疫抗体合格率较低。

口蹄疫防控比较复杂，这与口蹄疫病毒血清型和亚型较多有关，不同血清型之间交叉保护较低，同型内不同亚型之间交叉保护不高，在毒株的进化中，新旧毒株之间交叉保护差异也较大，这就要求在实施免疫中，应用的疫苗要有针对性。一般在口蹄疫疫病流行过程中，毒株并不一定是单一一种，一个地方可能同时或交错流行几个毒株，这使防控形势非常严峻。猪O型口蹄病毒流行毒株，旧毒株以OR/80等为代表，新毒株以90年代的TW/97和20世纪初的GX/09-7等为代表，以及东南亚传入的Mya-98株等。猪场在选择口蹄疫疫苗时要根据当地及周边地区流行状态确定，做到有目的的实施。