孙 澜 邹 伟 刘晓华

（1 辽宁省辽阳市中心医院检验科，辽宁 辽阳 111000；2 辽宁省瓦房店市中心医院检验科，辽宁 瓦房店 116300）

葡萄球菌是临床上的一个重要致病菌，尤其是金黄色葡萄球菌，由于他能产生多种毒素和酶类，因而更引起人们的重视。而金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌的鉴别主要依据凝固酶试验。凝固酶试验又分：试管法凝固酶（游离凝固酶试验）、凝聚因子试验（又称玻片法凝固酶）、乳胶凝集试验[1-2]。为了了解这3种方法的敏感性和特异性，我们先用MicroScan auto SCAN4细菌鉴定仪对从临床各种标本分离出来的208株葡萄球菌进行鉴定，再与这3种方法进行比较。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：本组208株葡萄球菌是从2016年1月至2017年10月临床各类标本（血、痰、脓汁、尿、大便等）中分离而得。

1.2 试剂和仪器：阳性质控菌AFCC25923为省临检中心所供、阴性质控菌为我院所鉴定的凝固酶阴性的表皮葡萄球菌、乳胶试剂购自英国OXOID公司、MicroScan auto SCAN4细菌鉴定仪。

1.3 方法：①仪器法：从临床各标本中分离出的细菌经革兰染色、触酶试验后上机鉴定。②玻片法：取一环生理盐水于玻片上，挑数个菌落混匀观察有无自凝现象，如无，再加一环混合血浆，10 s之内出现明显凝集颗粒为阳性。③试管法按《全国临床检验操作规程》操作。④乳胶法：按（Diagnostic REAGENTS》说明书操作，并作阴、阳质控对照。

2 结 果

用仪器鉴定208株菌，其中金黄色葡萄球菌150株（MRSA为114株）、溶血葡萄球菌26株（均耐甲氧西林）、表皮葡萄球菌30株（其中26株耐甲氧西林）、华纳葡萄球菌2株。与仪器相比较，玻片法实际上测得金葡菌108株、试管法测得金葡菌142株。玻片法假阳性主要为耐甲氧西林溶葡萄球菌。玻片法、试管法的假阴性基本上是MRSA，乳胶法阳性结果为152株。乳胶法敏感性为100%特异性为98.7%，试管法敏感性为94.7%，特异性为100%，玻片法敏感性为72%，特异性为78.7%。3种方法的结果与比较见表1、表2。

表1 3种鉴定金黄色葡萄球菌凝集试验方法学的结果的比较（n=150）

表2 3种不同凝集方法不一致的结果

3 讨 论

本试验结果显示用乳胶法和试管法检测金葡菌结果可靠，其敏感性和特异性均无显著性差异（P＞0.05），且试验结果与沈阳军区总医院候丽娜所报道的相似[3-4]。玻片法、试管法凝固酶试验假阴性主要发生在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，尤其是玻片法，在本试验中114株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中有34株凝固酶试验测的为阴性。造成这种现象的原因，普遍认为是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌能产生大量的多糖英膜，包被细胞壁，使得凝固酶试验假阴性，从而使敏感性降低[5-6]。用玻片法检测52株耐甲氧西林溶血葡萄球菌，其假阳性高达92.3%，另外我们在血平板上还观察到溶血葡萄球菌的菌落形态、溶血特征都酷似金葡菌，如用玻片法测其凝聚因子，很容易误报为金黄色葡萄球菌。因此我们认为玻片法凝聚因子试验不宜作为鉴定金黄色葡萄球菌的可靠指标。葡萄球菌能产生几种细胞外蛋白水解酶（蛋白酶），这些酶不能形成葡萄球菌凝血酶，但能产生假凝固酶。这些蛋白酶在一定条件下可刺激葡萄球菌凝固酶的凝固作用。溶血葡萄球菌不含有凝固酶和凝聚因子，耐甲氧西林溶血葡萄球菌玻片法凝固酶试验假阳性，是否是产生了细胞外蛋白水解酶所致，还值得探讨。掌握怎样观察乳胶试剂结果，我们认为非常重要。在本试验中华纳葡萄球菌被误报为金葡菌，就是把细小的凝集颗粒作为了阳性。真正的凝集颗粒呈粗沙粒状，凝集后的液体清亮。另外观察的时间一定要控制在10秒之内[7-8]。