苏 琦，赵 娜，苗雨欣，李朝阳，肖 童，孙雅涵，何玛丽，田 炜，徐菁蔓△

(1.华北理工大学医学实验研究中心，河北 唐山 063210； 2.华北理工大学实验动物中心，河北 唐山 063210； 3.国家科技部老年医学国际科技合作基地，河北 唐山 063210)

心肌缺血/再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury，MIRI)是指缺血心肌在恢复血流之后发生的更加严重的损伤，常出现梗死面积扩大和心率失常[1]。氧化应激(oxidative stress，OS)是机体受到多种有害因素刺激后，活性氧簇(ROS)产生过多，抗氧化能力下降对机体造成损伤。在MIRI中ROS大大增加，造成病理损伤[2]。近年来,磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)信号途径已成为研究热点，Akt对下游信号分子的活化起重要作用，如糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)[3]，GSK-3β磷酸化失活对于抗氧化应激损伤尤为重要，故本实验以此作为研究方向。

银杏内酯B(ginkgolide B，GB)是银杏叶(ginkgo biloba L)提取物。银杏叶化学成分丰富，其主要有效成分为萜内酯类化合物，包括银杏内酯A、B、C等[4]，其中GB生理活性最强[5]。研究发现，GB可以用于治疗心血管疾病，具有抗炎、抗氧化等作用[6]，但在MIRI方面研究甚少。本实验意在探讨GB能否具有发挥抗氧化应激损伤的作用及其作用机制，以期为MIRI临床治疗提供方向。

1 材料与方法

1.1 细胞株

H9c2细胞株(来源于大鼠胚胎心脏组织)购自美国ATCC 公司。

1.2 试剂与仪器

实验药物银杏内酯B(Ginkgolide B GB)由北京百威灵科技有限公司提供(纯度>99%)；H2O2(批号STBB6350)购自美国Sigma 公司；兔源单克隆抗体p-Akt(Ser473)、p-GSK-3β(Ser9)、鼠源微管蛋白β-Tubulin(多克隆抗体)及辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG二抗均购自美国Cell Signaling Technology公司；荧光染料罗丹明123(Rhodamine 123)购自上海碧云天生物技术……