申　敏

荧光PCR技术在酿酒酵母细胞测定中的应用

申敏

（长治职业技术学院山西长治046000）

聚合酶反应（PCR）作为一种敏感特意的核酸分子定性检测的方法，在基因诊断中有着重要的作用，可是传统PCR技术存在着诸多无法攻陷的难关，比如PCR后需要进行手工操作，无法定量，PCR产物容易污染等。随着科技的发展，实时PCR技术诞生，有效的解决了传统PCR技术的弊端，实现了定量分析，因此其被广泛的用于食品工程中。文章采用实时荧光PCR技术应用于测定果汁中酿酒酵母细胞的含量，确立了一种实时荧光PCR检测方法，提高了检测的准确性，提升了检测效率。

荧光PCR技术；酿酒酵母细胞；DNA

实时荧光PCR技术是将传统PCR技术为基础，逐渐发展而来的一种核酸定量技术，其被用于细胞研究中，是一种常见的细胞研究方式。借助荧光PCR技术能够更加立体而又直观的观察肉眼所及的生命现象。当前，实时荧光PCR技术被普遍用于转基因成分、动植物病毒、临床样品以及微生物等不同生物成分的检测。笔者将实时荧光PCR技术用于探测果汁中的酿酒酵母细胞的含量，提升了检测效率，明确了检测方法的灵敏度与特异性。

1 材料和方法

1.1 材料和设备

基因提取试剂盒、ABI7300 型荧光PCR仪。

1.2 实验方法

测定酿酒酵母的检出下限。温度：28 ℃；时间：24 h。在1ml培养液中采用酵母基因组提取试剂盒提取其中的DNA，将提取出来的DNA进行稀释。同时，选择七份均为1ml的培养液，标号1、2、3……7，其中培养液1为原液，培养液2-7以10 、100 、1000 ……的倍率稀释，利用倾注平板法计算培养液中的菌落数量，为了提升计数的准确性，不同培养液重复计算两次。