王 睿 程 平

(1.四川大学生物治疗国家重点实验室,四川成都 610041;2.中牧实业股份有限公司成都药械厂,四川成都 610100)

猪圆环病毒2型（PCV2）由Ellis等（1998）首次从断奶后多系统衰竭综合症（PMWS）病猪体内分离到，属于圆环病毒科，圆环病毒属成员，已证明是PMWS发生的必要病原。目前，我国猪圆环病毒2型市售疫苗主要以灭活全病毒疫苗为主，表达蛋白疫苗也在逐渐增多。在对其疫苗效力进行评价时，常采用免疫动物，采集血清，通过测定血清抗体效价的方法进行。目前，市场上有很多检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA试剂盒，不同厂家的试剂盒其成分均有差别，对同一样本的评价也是高低不一。因此，使用市售Elisa试剂盒对不同厂家疫苗进行评价，很难有一个清楚的结果。因此，我们尝试建立一种适合于经灭活疫苗免疫的猪血清抗体检测的间接Elisa，为我厂疫苗产品的改进优化提供较为可靠的数据支持。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

猪圆环病毒2型Cap蛋白由中牧研究院表达制备；酶标板，购自Thermo公司；牛血清白蛋白（BSA），购自Amresco公司；酪蛋白，购自Sigma公司；HRP标记羊抗猪酶标二抗购自KPL公司；可溶型单组分TMP底物溶液、增强型HRP-DAB底物显色试剂盒均购自TIANGEN公司。

1.2 猪圆环病毒2型抗体阳性对照血清和阴性对照血清制备

猪圆环病毒2型抗体阳性对照血清，采用猪圆环病毒2型灭活疫苗，以1头份/头的剂量免疫2月龄无猪圆环病毒2型抗体的仔猪，21d后以2头份/头的剂量重复免疫，14d后颈动脉采血，无菌分离血清。阴性对照血清为2月龄无猪圆环病毒2型抗体仔猪，前腔静脉采血，分离血清。……