李姚，王健

年龄相关性黄斑变性 (age-related macular degeneration，AMD)属于视网膜退行性疾病，该病病理学发生基础为视网膜色素上皮 (retina pigment epithelium，RPE)细胞[1]。RPE 细胞为单层柱状细胞，容易受到周围环境影响，RPE细胞损伤后可引起光感受器变性、视网膜变薄[2]。藏红花素（Crocin）是从藏红花植物茎中提取的单体化合物，具有抗氧化、抑制炎症反应、保护神经细胞等作用[3]。已有学者将其应用于眼部，发现藏红花素能提高视网膜抗氧化能力、抑制视网膜神经节细胞凋亡、改善视网膜微循环的作用[4]。本文拟通过采用体外高氧条件下培养RPE细胞，初步探讨藏红花素对H2O2诱导的RPE细胞凋亡的影响及可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料

RPE细胞 (美国ATCC公司)，藏红花素(美国Sigma 公司，纯度>99%)，二甲基亚砜、H2O2（北京索莱宝科技有限公司），胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，杭州四季青公司)、MTT试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司)，Annexin-V/PI试剂盒及H2DCFDA荧光探针 (美国BD公司)，Bcl-2及Bax抗体（上海碧云天公司）。

1.2 RPE细胞培养及分组

RPE细胞培养 将RPE细胞置于DMEM培养基中，内含10%胎牛血清，青霉素100 U/mL、链霉素100 μg/mL，培养箱内温度为37℃，CO2体积分数为5%，每3 d传代1次，取对数期生长的细胞进行实验。

RPE细胞分组 细胞接种于96孔板中，共分4组，每组5个复孔。（1）对照组：以正常培养液培养。（2）氧化损伤组：培养液内 H2O2浓度为 300 μmol·L-1。（3）藏红花素组：加入藏红花素作用 24 h之后，加入300 μmol·L-1H2O2溶液作用 12 h，依藏红花素浓度不同分为 2 个亚组 (10 μmol·L-1及 100 μmol·L-1)。

1.3 MTT法测定细胞增殖

RPE细胞接种于96孔板中，每孔200 μL，细胞密度为1×104个/L，向各孔细胞中加入10 μLMTT(5 g·L-1)，4 h 后吸出上清液， 加入 100 μL DMSO溶液，轻微振荡10 min后测定各孔570 nm的光密度值（OD）。细胞增殖率=（实验组OD-空白组OD）/（对照组OD-空白组OD）×100%。