朱守记， 王小淑， 徐士超， 赵振东*

(1.中国林业科学研究院 林产化学工业研究所；生物质化学利用国家工程实验室；国家林业和草原局 林产化学工程重点实验室；江苏省 生物质能源与材料重点实验室， 江苏 南京 210042；2.韩山师范学院 化学与环境工程学院， 广东 潮州 521041； 3.广西科技师范学院 食品与生化工程学院；广西高校制糖工程综合技术重点实验室， 广西 来宾 546199)

1 实 验

1.1 原料、试剂与仪器

1.2 抑菌活性测试

1.2.1 供试菌种 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC-26069、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)GIM-1.279及白色念珠菌(Candidaalbicans)ATCC-10231均由中国普通微生物菌种保藏管理中心提供。

1.2.2 培养基配制 采用微量肉汤稀释法，在250 mL三角瓶中加入2.1 g 水解酪蛋白(MH)肉汤复合培养基和100 mL蒸馏水，于121 ℃灭菌30 min，作为金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌的培养基。在250 mL三角瓶中加入2.6 g 马铃薯葡萄糖水复合培养基和100 mL蒸馏水，于121 ℃灭菌30 min，作为白色念珠菌的培养基。

1.2.3 样品溶液的配制 分别称取样品0.06 g，置于10 mL的无菌试管中，加入2 mL DMSO溶解，得到30 g/L的溶液，取30 μL该溶液溶于970 μL含3% DMSO的无菌培养基溶液中，得到质量浓度为900 mg/L的样品溶液(作为母液)。

1.2.4 菌悬液的配制 挑取少量菌种到10 mL的小烧杯中，用无菌水稀释至相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液。取50 μL上述菌悬液，并用相应的无菌培养基稀释1 000倍，作为初始菌悬液。

1.2.5 抑菌活性测试 往96孔平板的2～11号孔中分别加入100 μL含3% DMSO的无菌培养基溶液，往1号孔和2号孔中加入100 μL已配好的母液。从2号孔中取100 μL母液到第3个孔中，从3号孔取100 μL样品溶液到4号孔，依次类推进行梯度稀释，最后弃去……