蔡 甜 陈振华 牛英波 唐 波

1.广东省佛山市南海区人民医院，广东佛山 528200；2.南京诺维赞医疗科技有限公司，江苏南京 210034

心脑血管病是当今威胁人类健康的主要疾病。70% ～ 80%的心脑血管事件是在不稳定动脉粥样斑块破裂基础上血栓形成导致的[1-2]。Lp-PLA2 是血管炎症的特异性生物标志物，在不稳定的动脉粥样硬化斑块中高表达[3-4]，能够有效预测高危人群发生心脑血管急性不良事件的概率[5]。量子点是一种半导体荧光材料，由于其直径在1 ～100nm 之间，因此具有很多常规荧光材料所不具有的性质[6-11]。随着近年来量子点各项技术水平不断发展，量子点已经广泛应用于生物标记、蛋白质检测等领域[12-16]。本研究评估了一种新型量子点Lp-PLA2 荧光免疫检测试剂，针对该试剂的精密度、定量限、线性范围进行检验，并选择动脉粥样硬化患者、健康人的血清Lp-PLA2 含量以评估该试剂准确性和应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料

Lp-PLA2 量子点荧光免疫检测试剂选择南京诺唯赞医疗科技有限公司生产，批号2017120501，型号为AFS-1000。质控品由南京诺唯赞医疗科技有限公司提供，批号为20180106。

1.2 方法

1.2.1 精密度 每天各测定4 次或同一天测定20次2 个不同浓度水平质控品：150、350ng/mL。共连续5d 进行检测，计算各个检测均值、标准差、变异系数（CV），确定日内精密度、日间精密度。

1.2.2 建立定量限（LOQ） 取五份Lp-PLA2 的低值样本，将各个样本重复20 次进行检验，记录检测值、精密度。

1.2.3 线性范围验证 选择1 份接近Lp-PLA2试剂上限浓度水平样本（H）和1 份处于检出限附近低值浓度水平样本（L），以H、1H+4L、2H+3L、3H+2L、4H+1L、L 方式进行稀释，重复检测并计算均值，与预期浓度水平进行比较。

1.2.4 Lp-PLA2 量子点荧光免疫检测试剂的临床验证 分别选择50 例颈动脉超声确诊的患有动脉粥样硬化，且存在不稳定斑块的患者以及40 例健康人。使用Lp-PLA2 量子点荧光免疫试剂进行检测，比较两组人群间Lp-PLA2 水平的差异。

2 结果

2.1 精密度

使用荧光定量分析仪对样本进行统一检测，检测结果显示精密度均＜10%（厂家声明值），符合精密度要求。见表1。

表1 Lp-PLA2量子点检测试剂精密度验证

2.2 定量限

选取5 个浓度的新鲜血清样本，每个样本进行20 次重复检测，定量限验证结果表明22.1ng/mL 的样本检测精密度为17.3%，而15.9 ng/mL 样本的检测精密度为25.1%，超出范围，因此确定该试剂的定量限为22.1ng/mL。见表2。

表2 Lp-PLA2量子点检测试剂重复性验证

2.3 线性范围验证结果

因无法获得浓度值接近1000ng/mL 的临床样本，因此分别选取Lp-PLA2 浓度为35.1ng/mL 和784.3ng/mL 的血液样本进行检测，按照混合比例不同重复多次检测，使用量子点Lp-PLA2 检测试剂检3 次。经处理，检测平均值与理论值之间的线性方程为y=0.9733x+4.7202，相关系数为0.998，因此量子点Lp-PLA2 试剂的线性范围为 35.1 ～784.3ng/mL。见表3。

表3 Lp-PLA2量子点检测试剂线性范围验证

2.4 Lp-PLA2量子点荧光免疫检测试剂的临床验证

比较动脉粥样硬化患者和健康人群血清Lp-PLA2 水平（见图1）。两组间Lp-PLA2 水平有显著差异。

图1 动脉粥样硬化患者与健康人Lp-PLA2 血清含量比较

3 讨论

本研究对Lp-PLA2 量子点荧光免疫检测试剂进行了性能验证和评估，其结果讨论如下。

3.1 精密度评价

该量子点Lp-PLA2 检测试剂的日内精密度和日间精密度均在10%以内，能够准确检测样本中的Lp-PLA2 含量，满足临床动脉粥样硬化患者诊断需求。

3.2 定量限评价

该方法检测Lp-PLA2 的定量限在22.1ng/mL以下，而检测健康人群的Lp-PLA2 浓度均在50ng/mL以上，因此该试剂的定量限能够满足临床诊断需求。

3.3 线性范围评价

该方法检测Lp-PLA2 的线性范围为35.1 ～784.3ng/mL。因未能收集到接近1000ng/mL 的样本，因此无法验证试剂线性范围上限是否能够达到1000ng/mL。但通过检测动脉粥样硬化患者的样本，发现患者Lp-PLA2 水平均在600ng/mL 以下，因此该试剂盒的线性范围能够满足准确评估粥样斑块稳定性的需求。

3.4 临床验证

利用该试剂检测存在易损斑块的动脉粥样硬化患者和健康人血清Lp-PLA2 浓度后发现两种人群Lp-PLA2 水平存在显著差异，说明Lp-PLA2 量子点检测试剂能够准确评估病人的疾病状态，并对临床治疗提供参考。

传统危险因素，如血脂、血压、血糖、吸烟和年龄等虽然都是动脉粥样硬化性疾病的危险因素[17]，但临床研究也表明很多发生心梗或者脑梗的病人并非存在全部危险因素，只有联合多种危险因素联合评估才能较好地预测患者风险[18]。Lp-PLA2 能够直接反映动脉粥样斑块的稳定性，是心梗或脑梗风险的直接评估指标[19]。本研究评估的Lp-PLA2 量子点荧光免疫检测试剂具有良好的检测性能，临床研究也表明该试剂能够准确评估患者的动脉粥样硬化状态。该方法在动脉粥样硬化高危患者的风险评估中具有极大的应用潜力。