刘莹莹 于珊珊 柴迎梅 林啸鹏 祝 茜

松江鲈白介素15(TfIL-15)的结构特征与重组表达*

刘莹莹 于珊珊 柴迎梅 林啸鹏 祝 茜①

(山东大学(威海)海洋学院 威海 264209)

为研究白介素15(Interleukin-15, IL-15)在松江鲈(Heckel)先天免疫中的功能，本研究利用RACE技术克隆得到松江鲈IL-15基因(命名为TfIL-15)的全长cDNA序列，其长度为1140 bp，包括5¢-非编码区(5¢-UTR) 165 bp、开放阅读框(ORF) 522 bp和3¢UTR 453 bp。在5¢UTR区域，存在4个读码框外的AUG翻译起始位点。基因ORF编码173个氨基酸(aa)，其中，前59 aa为信号肽序列。成熟肽全长为114 aa，预测分子量为12.975 kDa，理论等电点为5.15。同源比对发现，鱼类IL-15变异程度较高，TfIL-15与其他鱼类IL-15同源性在23%~61%之间。多序列比对和三维结构构建结果显示，TfIL-15具有典型4个α螺旋二级结构，形成二硫键的4个半胱氨酸高度保守。qRT-PCR分析表明，TfIL-15广泛表达于松江鲈各组织中。腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)后，TfIL-15 mRNA在血液、皮肤、肝脏和脾脏中均上调表达。在皮肤和血液中，刺激后2 h表达量迅速上调至最高峰，分别为对照组的74倍和41倍。脾脏和肝脏在刺激后12 h分别达到对照组的3倍和18倍。肝脏中，刺激后96 h，表达量再次上调至对照组的86倍。上述结果表明，TfIL-15可能参与了松江鲈抵抗外界刺激的先天免疫过程。另外，通过构建TfIL-15成熟肽的原核表达载体，成功获得重组蛋白，为进一步研究TfIL-15蛋白的功能奠定了基础。

松江鲈；白介素15(IL-15)；克隆；基因表达；重组蛋白表达

IL-15是白介素(Interleukin, IL)家族的重要成员之一，它与IL-2、GM-CSF(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)、G-CSF(粒细胞集落刺激因子)等，同属于4α螺旋细胞因子家族(Lodolce, 2002)。转录水平的IL-15存在于多种类型细胞和组织器官中，包括表皮细胞、上皮细胞、神经细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞及心脏、肺、脾和骨骼肌等(Carson, 1995; Lee, 1996)。……