宫梦晓，邓鑫州，沈力，张梦琳，柯青，吴林，刘艳芹，陈晓琳，邱小燕，骆志国

0 引言

近年来，我国喉癌发病率及死亡率不断上升，已成为头颈部最常见的恶性肿瘤之一[1]，晚期喉癌术后同期放化疗的5年生存率为68.2%，单纯放疗的5年生存率仅为48.9%[2]。放疗在喉鳞癌的治疗中起到至关重要的作用[3]。放射抵抗是导致放疗失败的重要原因[4]。

UBE2N是泛素交联酶E2家族的成员之一。泛素交联酶E2家族参与泛素-蛋白酶体复合通路（ubiquitin-proteasome pathway, UPP）对底物蛋白的泛素化降解[5]。泛素-蛋白酶体复合通路在调控细胞周期、增殖、信号转导、DNA损伤修复、免疫应答等方面都发挥着重要作用[6]。UBE2N是DNA损伤修复通路的成员[7]，DNA损伤后，UBE2N与泛素连接酶RNF8及RNF168结合后，促进DNA损伤反应中BRCA1及H2AX的泛素化修饰，从而促进下游DNA损伤反应的进行[8]。研究发现泛素交联酶UBE2N可能调控肿瘤细胞的放疗敏感度[9]。本研究沉默喉鳞癌hep-2细胞中UBE2N的表达，通过CCK8法、流式细胞术及克隆形成等实验，验证沉默UBE2N表达后对喉鳞癌细胞放射敏感度的影响，为明确UBE2N在调控喉鳞癌细胞放射敏感度中的作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

DMEM培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；UBE2N siRNA沉默序列和阴性对照序列均由上海吉玛公司合成。RNA反转录试剂盒、PCR扩增试剂盒购自日本TaKaRa公司；蛋白裂解液、蛋白提取试剂盒、BCA蛋白定量试剂盒、细胞周期检测试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒均购自南通碧云天生物技术研究所；内参GAPDH购自苏州GenePharma公司。GAPDH抗体、β-actin抗体、UBE2N抗体及各HRP-标记二抗购自英国Abcam公司；ECL化学发光试剂盒购自美国Thermo公司。……