费腾 付雪侠 王勇 赵亚坤 李丹

摘 要：建立一种高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定3种葡萄汁中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的方法。采用ZORBAX Carbohydrate（4.6mm×150mm 5μm）色谱柱，乙腈水（80：20）流动相，氮气（1.8L/min）辅气，漂移管温度为100℃。结果表明：在该条件下，3种糖组分在15min内都能够较好地分离，利用外标法测得 “白玫瑰”、“红宝石”、“巨峰”果糖含糖量分别为14.19%、14.70%、13.30%，葡萄糖含量分别为10.36%、9.08%、8.70%，“巨峰”蔗糖含量为2.4%，另2种葡萄未检出蔗糖。“巨峰”的果糖、葡萄糖含量对“白玫瑰”和“红宝石”具有差异性（P<0.05）。该方法具有操作简单、快速、灵敏度高等特点，是测定葡萄汁中糖含量的理想方法。

关键词：葡萄汁;HPLC—ELSD;果糖;葡萄糖;蔗糖;含量测定

中图分类号：S-33

文献标识码：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20190630002

葡萄品种繁多，在中国约有800多种。“白玫瑰”又名泽玉，皮薄，果粒饱满，肉质细软，酸甜适口。“红宝石”，原产美国，1987年引入中国，果皮薄，果肉脆，无核，味甜爽口。“巨峰”，原产日本，1959年引入中国，为主栽品种之一，粒大果皮厚，果肉较软，味甜、多汁，有草莓香味。均属于市面常见的葡萄品种。

葡萄是营养价值极高的水果，葡萄中含有大量糖、氨基酸、维生素、花青素、矿物质等多种营养成分，也含有黄酮类化合物、白藜芦醇等生物活性成分[1]。常食葡萄对神经衰弱、疲劳过度大有裨益，能“清洗”血液，防止胆固醇斑块的形成，减少心血管疾病的发病风险，有益于那些局部缺血性心脏病和动脉粥样硬化心脏病患者的健康[2]。

糖是葡萄汁中的最主要的成分，据现代药理研究证明，当人体出现低血糖时，若及时饮用葡萄汁，可使症状得到缓解。

糖的种类和含量决定葡萄汁营养品质和感官品质，在葡萄汁中一般可以品出味道的糖类有葡萄糖、果糖、蔗糖等，这些糖分在不同品种葡萄中含量各不相同，研究葡萄汁中糖组分含量情况，为民众日常选择食用葡萄汁提供科学依据。

糖类含量的测定，通常采用苯酚硫酸法、3，5-二硝基水杨酸法、蒽铜法等分光光度比色法，但是只能测定总糖的含量。为了测定糖的单个组分含量，采用高效液相色谱柱分离、再经检测器定量，是目前比较常用的方法;由于果糖、葡萄糖、蔗糖等没有紫外吸收，不能采用紫外检测;可以使用示差折光检测器（RID）[3]与高效液相色谱（HPLC）联机进行测定。但是此方法存在灵敏度低，系统平衡时间较长，要求恒温、恒流速、基线噪音大，且无法使用梯度洗脱等缺点。也可以使用电化学检测器（ECD）[4]，此方法检出限低，但对样品的前处理要求较高，难以祛除的杂质会在电极表面氧化，导致峰面积和峰高的变化，影响定量分析的准确性。

蒸发光散射检测器（ELSD）作为新一代通用型质量检测器，对有质量的物质都能检测，对没有紫外吸收、电活性的物质以及产生末端紫外吸收的物质均能产生响应。蒸发光散射检测器在测量半挥发或不挥发样品的光散射之前首先把流动相蒸发掉，所以检测器的响应不受溶剂和样品特殊性质的影响，弥补了高效液相色谱传统检测器的不足[5-8]。

目前用高效液相色谱测定葡萄汁中糖含量的研究相对较少，本研究采用高效液相色谱—蒸发光散射检测法来测定种葡萄汁中糖的含量，建立了一种操作简单、快速、直接测定葡萄汁中糖含量的方法。

1 材料与方法

1.1 实验材料与化学试剂

果糖、葡萄糖、蔗糖（德国Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司），乙腈（色谱纯，Fisher），水。

为高纯水，流动相经0.2μm 滤膜过滤（聚醚砜，MEMBRANA公司，德国）。

葡萄样品：“白玫瑰”，“红宝石”，“巨峰”，市售（均产自辽宁省熊岳县）。

1.2 方法

1.2.1 样品溶液的配置

样品溶液制备：精确称取150g葡萄，分别放入高速组织捣碎机（HGB2WTS3，Waring，美国）中进行榨汁，时间为3min，将葡萄汁放入离心管，离心机（Beckman 美国）的转子为JA25.5，转速9000g，4℃进行离心20min，取上清液，用滤纸进行1次抽滤得到原汁液。用蒸馏水稀释100倍，然后以0.45μm孔径的微孔滤膜（聚醚砜，MEMBRANA公司，德国）过滤。滤液供HPLC-ELSD分析。

1.2.2 色谱条件和蒸发光散射器参数

高效液相色谱仪（Dionex P680 HPLC pump，美国）;ZORBAX Carbohydrate色谱柱（安捷伦4.6mm×150mm#5-Micron，美国）;流动相，乙腈：水（80：20v/v）;流速，1.0mL/min;柱温：30℃;蒸发光散射检测器（Alltech 3300 ELSD，美国）条件： 漂移管温度：100℃，氮气为辅气（流量：1.8L/min）;进样体积：20μL。

1.2.3 色谱峰的确定

称取各标准品25mg，分别溶于50mL容量瓶中，分别在1.2.2色谱条件下进样，记录各标准品的保留时间，混标色谱图与之相比较，根据保留时间确定各色谱峰成分。

1.3 样品含量测定与计算

根據混合样品各组分糖的保留时间确定样品中的组分，根据峰面积，采用外标法，计算样品中各组分糖含量。

1.4 统计分析

采用SPSS（IBM SPSS Statistics 23.0）软件进行数据处理和分析。数据表示为平均值加减标准差，采用LSD法对3个品种葡萄汁的果糖含量和葡萄糖含量进行多重比较（P<0.05）。