吴畅　刘海玲　刘薇薇　王俊普　文继舫

【摘要】 目的：探討HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67蛋白在原发性肝细胞肝癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法：应用免疫组化Envision法检测，79例HCC组织分别进行HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67的表达;进一步分析其表达特点及与临床病理特征的相关性。结果：患者HepPar-1、GPC3、AFP表达阳性率分别为68.3%（54/79）、86.0%（68/79）、31.6%（25/79）;Ki-67增殖指数为（33±25）%。HepPar-1阳性率在低分化肿瘤中最低，GPC3、AFP和Ki-67阳性率在低分化肿瘤中最高。HepPar1的表达在分化程度、是否合并肝硬化等临床病理特征方面存在差异（P<0.05）。AFP的表达在组织分化程度、微血管侵犯（MVI）、卫星结节等临床病理特征方面存在差异（P<0.05）。Ki-67的表达在组织分化程度、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、卫星结节、肿瘤性坏死和性别等临床病理特征方面存在差异（P<0.05）。结论：HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67在肝细胞肝癌的临床病理诊断中有重要参考价值。GPC3、AFP及Ki-67与肝细胞肝癌的临床病理特征关系密切，对该疾病的预测及恶性程度的评估具有重要的参考价值。

【关键词】 肝细胞肝癌; HepPar-1; GPC3; AFP; Ki-67; 免疫组织化学

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.09.002 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2019）09-000-05

Cliniccopathological Significance and Correlation of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 Levels in Human Hepatocellular Carcinoma/WU Chang，LIU Hailing，LIU Weiwei，et al.//Chinese and Foreign Medical Research，2019，17（9）：-7

【Abstract】 Objective：To analyze the expression of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 proteins in primary hepatocellular carcinoma and the clinicopathological characteristics.Method：Immunohistochemical study（Envision method） for HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 was carried out in 79 cases of HCC tissues.The relationship between expression of HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 and clinicopathologic features in HCC were also analyzed.Result：The positive expression rates of HepPar-1，GPC3 and AFP were 68.3%（54/79），86.0%（68/79） and 31.6%（25/79），respectively，and the proliferation index of Ki-67 was （33±25）%.The positive rate of HepPar-1 was the lowest in poorly differentiated tumors，and the positive rates of GPC3，AFP and Ki-67 were the highest in poorly differentiated tumors.There were differences in the expression of HepPar1 in the degree of differentiation，whether HepPar1 was associated with liver cirrhosis（P<0.05）.There were differences in the expression of AFP in tissue differentiation，microvascular invasion（MVI），satellite nodules（P<0.05）.The expression of Ki-67 showed differences in the degree of tissue differentiation，microvascular invasion（MVI），hepatic capsule invasion，satellite nodules，tumor necrosis，gender（P<0.05）.Conclusion：HepPar-1，GPC3，AFP and Ki-67 have important reference value in the clinicopathological diagnosis of hepatocellular carcinoma.GPC3，AFP and Ki-67 are closely related to the clinicopathological characteristics of hepatocellular carcinoma，which has important reference value for the prediction of this disease and the evaluation of the degree of malignancy.

【Key words】 Hepatocellular carcinoma; HepPar-1; GPC3; AFP; Ki-67; Immunohistochemistry

First-authors address：Shenzhen Sixth Peoples Hospital，Shenzhen 518052，China

肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球第六大常见的癌症，也是高居癌症相关死亡率的第三大原因，据统计全球每年新发肝癌病例超过50万例[1]。HCC的发病率和死亡率最高的是中国，全球50%以上的肝癌发生在中国[2-3]。随着HCC患病率的逐年增加，为全社会带来重大经济和医疗保健负担。HCC的主要治疗方法是手术切除、移植、放疗、化疗和射频。但早期肝癌的症状不明显，诊断率较低，且肝癌病情进展较快，确诊时多数进展至中晚期，已经发生远处的扩散和转移。近几十年来，全球对肝癌的临床和基础研究都取得了不小的进步。但其诊疗效果仍有待于进一步提高。本研究采用免疫组化Envision法检测HepPar-1、GPC3、AFP及Ki-67蛋白表达情况，探讨其与肝细胞肝癌的临床病理特征的关系，为肝细胞肝癌的侵袭转移及预后判断提供客观指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究中的所有标本取自2017年1月-2018年12月在中南大学附属湘雅医院确诊并进行手术治疗的肝细胞肝癌患者，总例数79例。纳入标准：按照2010版WHO标准经病理检查确诊为原发性肝细胞肝癌，均经病理检查确诊;术前未进行放化疗。排除标准：活检标本;免疫组化的资料不完整者。其中男58例，女21例;年龄26～74岁，平均50岁;≥45岁58例，<45岁21例;肝癌直径<5 cm 36例;≥5 cm 43例;组织学分化程度：高分化13例，中分化36例，低分化30例;微血管侵犯（MVI）的分组：M0：未发现MVI;M1（低危组）：≤5个MVI，且发生于近癌旁肝组织区域（≤1 cm）;M2（高危组）：>5个MVI，或MVI发生于远癌旁肝组织区域（>1 cm）。M0组33例，M1组42例，M2组4例。合并肝硬化70例，无肝硬化9例。有肝被膜侵犯36例，无肝被膜侵犯43例。有卫星结节23例，无卫星结节56例。有肿瘤性坏死31例，无肿瘤性坏死48例。该研究已经伦理学委员会批准，患者知情同意。

1.2 方法

送检组织经4%中性甲醛液固定，常规脱水，石蜡包埋，

3 μm厚度切片，HE染色，光镜观察。选取肿瘤与正常组织同时存在的蜡块，4 μm厚度切片行免疫组化，采用Envision法，一抗为HepPar-1、GPC3、AFP及Ki67，抗体及所用免疫组化试剂均购于福州迈新生物技术开发有限公司，操作步骤按照试剂说明书进行。以上操作均用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照，每例都有HE切片作对照观察。

1.3 结果判定

阳性结果明确，阳性信号的位置正确且染色特征正确。HepPar1（Hep）、glypican-3（GPC3）和AFP均明确定位于细胞质，阳性为出现均匀棕黄色颗粒。Ki67定位于细胞核。HepPar1（Hep）、glypican-3（GPC3）和AFP先根据染色强度进行评分：无染色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，棕褐色为4分;然后根据阳性细胞所占百分比进行判断，当阳性细胞<10%为局灶（+），≥10%为弥漫（+）。只有当染色强度≥2分且为弥漫阳性时才判断为阳性。计算肿瘤细胞中Ki-67增殖指数，即Ki-67阳性的百分比，<10%为阴性（-），10%～50%为低表达（+）;>50%为高表达（++）[4]。

1.4 统计学处理

采用统计学SPSS 24.0软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HepPar1表达与肝细胞肝癌临床病理特征的关系

（1）HepPar1在HCC中的阳性率68.3%。（2）HepPar1阳性率在低分化肿瘤中最低。（3）HepPar1的表达在分化程度、是否合并肝硬化等临床病理特征方面存在差异（P<0.05），而在性别、年龄、肿瘤直径、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、卫星结节和肿瘤性坏死等方面均无明显差异（P>0.05），见表1。

2.2 GPC3表达与肝细胞肝癌临床病理特征的关系

（1）GPC3在HCC中的阳性率86.0%。（2）GPC3阳性率在低分化肿瘤中最高。（3）GPC3的表达在性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、是否合并肝硬化、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、卫星结节和肿瘤性坏死等方面均无明显差异（P>0.05），见表2。

2.3 AFP表达与肝细胞肝癌临床病理特征的关系

（1）AFP在HCC中的阳性率31.6%。（2）AFP阳性率在低分化肿瘤中最高。（3）AFP的表达在组织分化程度、微血管侵犯（MVI）、卫星结节等临床病理特征方面存在差异（P<0.05），而在性别、年龄、肿瘤直径、是否合并肝硬化、肝被膜侵犯和肿瘤性坏死等方面均无明显差异（P>0.05），见表3。

2.4 Ki-67表达与肝细胞肝癌临床病理特征的關系

Ki-67增殖指数为（33±25）%（最低值3%，最高值90%）。Ki-67的表达在组织分化程度、微血管侵犯（MVI）、肝被膜侵犯、卫星结节、肿瘤性坏死和性别等临床病理特征方面存在差异（P<0.05），而在年龄、肿瘤直径、是否合并肝硬化等方面均无明显差异（P>0.05），见表4。