楚文丽 程旭东 蔡 琳

肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，多在40岁以上发病，在男性中的发病率多于女性[1]。非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)为肺癌的主要类型，在临床上主要表现为发展迅速、起病隐匿，多数患者确诊时已属晚期，导致预后生存期短[2-3]。如果NSCLC在发生早期时就能诊断出，并将病灶完全切除，可显著提高患者的5年生存率。分子生物学研究显示NSCLC的发生与发展是一个多基因、多步骤参与的遗传性疾病[4-5]。趋化因子是由白细胞分泌的可溶性小分子蛋白，其与机体的炎性反应、肿瘤的发生密切相关。趋化因子26(CCL26)又称巨噬细胞炎性蛋白，属于CCL趋化因子家族中的一员，能够介导肿瘤细胞的增殖等[6-8]。本文具体探讨了CCL26蛋白对肺癌早期诊断及预后预测的价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究时间为2012年1月到2013年6月，采用回顾性总结研究方法，选择在我院经病理学诊断为NSCLC的患者78例，纳入标准：患者知情同意本研究；NSCLC患者术前未经放疗、化疗治疗；临床与检测资料完整；医院伦理委员会批准了此次研究。排除标准：临床与检测资料不完整者；妊娠与哺乳期妇女；严重心、肾功能不全患者，伴有出血性疾病、出血倾向患者。78例中男性50例，女性28例；平均年龄(55.25±11.11)岁；平均体重指数(22.19±2.93)kg/m2；平均病程(5.22±1.48)年；肿块大小：≥3 cm 40例，<3 cm 38例；淋巴结转移32例，远端转移20例；组织学类型：腺癌38例，鳞癌40例；临床分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期30例，Ⅲ期18例；分化类型：高分化40例，中分化20例，低分化18例。

1.2 免疫组化分析

取所有患者的癌组织及相应的癌旁正常黏膜组织(距离癌组织5 cm以上)。采用卵白素-生物素-辣根过氧化氢酶复合物(ABC)法进行免疫组化分析，小牛冻干血清蛋白(BSA)购自美国Sigma公司，DAB底物试剂盒购自上海生工公司，兔抗人趋化因子CCL26多克隆抗体(ab115653)购自美国Sigma公司。所有组织标本严格按照试剂盒的说明书步骤操作。

1.3 观察指标

CCL26阳性细胞标准为细胞胞质出现黄棕色染色颗粒，在显微镜 (×400)下计数5个随机视野，着色强度为无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞比例≤5%为0分，>5%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。最后两部分相乘得总分，总分0～1分为阴性，≥2分为阳性。所有患者随访5年，观察并记录预后5年的生存情况。

1.4 统计方法

2 结果

2.1 CCL26表达对比

CCL26在癌组织与癌旁组织的阳性表达率分别为51.3%(40/78)和12.8%(10/78)，对比差异有统计学意义(χ2=26.4491，P<0.05)。

2.2 CCL26与NSCLC临床病理参数的关系

在癌组织中，CCL26的阳性表达率与临床分期、分化程度、远端转移、淋巴结转移都有显著相关性(P<0.05)。见表1。

表1 CCL26与NSCLC临床病理参数的关系(例，%)

2.3 CCL26与NSCLC预后5年生存率的关系

Kaplan-Meier生存率分析显示CCL26阳性表达患者5年生存率为30.0%(12/40)，显著低于CCL26阴性表达患者55.3%(21/38)，差异有统计学意义(χ2=5.090，P=0.024)。

2.4 影响因素分析

以NSCLC患者预后作为因变量，把调查的内容与各项检测数据作为自变量，多元线性逐步回归分析显示CCL26阳性表达、淋巴结转移、低分化、远端转移为影响NSCLC患者预后的主要影响因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响NSCLC患者预后的主要影响因素分析(n=78)

3 讨论

NSCLC是临床上常见的恶性肿瘤之一，其死亡人数超过了乳腺癌、前列腺癌的总和，当前在我国发病率和死亡率均呈明显上升趋势[9]。该病的发病年龄高峰在60～79岁之间，男女之比为2.13∶1。早期用于NSCLC诊断的方法多为胸部X线等影像学方法，虽然检出的敏感性高，但是特异性差，很难降低NSCLC的死亡率。病理学检查对于患者的创伤比较大，早期筛查效果不太适应[10]。

趋化因子是一种能够结合到靶细胞上的特异性G-蛋白-耦联受体的化学诱导因子[11]，其中CCL26基因位于染色体7q11.2，其受体为CCR3。本研究显示，癌组织中CCL26的阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。有研究显示CCL26能够介导肿瘤细胞的增殖、炎性细胞的趋化等，可能在肿瘤发病中发挥重要作用[12]。

随着分子生物学技术的发展，特异性的分子标志物为NSCLC早期诊断提供了新的可能，特别是NSCLC从没有侵袭性到具有侵袭性的这段时间比较长，而这段时间正好为NSCLC进行早期分子诊断提供了窗口期[13]。多种趋化因子都具有促进肿瘤增殖的作用，趋化因子可通过帮助逃避机体的免疫监测，诱导血管的发生，在肿瘤进展中起着至关重要的作用[14]。阻断CCR5能够促进表达野生型p53基因的乳腺癌细胞的增殖[15]。本研究显示在癌组织中，CCL26的阳性表达率与临床分期、分化程度、远端转移、淋巴结转移都有显著相关性(P<0.05)，也说明趋化因子CCL26在NSCLC的转移与病情进展中发挥着重要的作用。

由于诊断手段的限制，NSCLC患者在确诊时病情大都已发展到中晚期，术后 5 年生存率一直徘徊在15%左右[16]。相关研究表明肿瘤生长排放大量趋化因子进入血液，阻断人体内正常的免疫反应，可能使白细胞发生“脱敏”反应，减弱机体对肿瘤侵袭的免疫保护作用，从而影响患者的预后[17-20]。本研究Kaplan-Meier生存率分析显示CCL26阳性表达的NSCLC患者5年生存率为30.0%，低于CCL26阴性表达患者的55.3%，对比差异有统计学意义(P<0.05)；多元线性逐步回归分析显示CCL26阳性表达、淋巴结转移、低分化、远端转移为影响NSCLC患者预后的主要影响因素(P<0.05)。提示CCL26阳性表达的NSCLC更加容易发生转移，从而导致患者死亡。不过本研究也存在一定的缺陷，比如样本数目不够，将在下一步研究中扩大样本量，以提高结果的科学性，同时通过高通量的手段筛选出更有价值的分子标志物。

总之，NSCLC组织中CCL26阳性表达率高，其阳性表达率和癌组织的临床分期、分化程度、远端转移、淋巴结转移显著相关，且能影响患者的5年生存率，可作为NSCLC患者临床预后预测指标之一。