姜峰玉 孙 抒 辛 悦 李 冰

目前对蝙蝠葛药理作用的研究已经取得了一定的进展，蝙蝠葛具有多种生物学活性，其根、茎叶、果实均有良好的药理效应，具有较好的应用前景和开发价值。不仅如此，现代研究认为蝙蝠葛活性成分具有体内外抗肿瘤作用，而受到了医药学领域的的广泛关注[1-2]。本实验研究中所用的蝙蝠葛活性成分由延边大学天然药物研究所提供，由本科实验室用MTT等检测方法一步一步地筛选其有效成分，现已经接近于单体。初步认为其有效成分是异喹啉衍生物。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

蝙蝠葛活性成分由延边大学天然植物制品研究所提供。人肺癌A-549细胞株购买于北京华美生科生物技术有限公司。

1.2 实验动物

BALB/cA裸小鼠，体重(21±1)g，雄性45～50日龄，由中国科学院上海药物研究所提供，合格证编号为SCXK(泸)2009-0017。阴性对照组12只；阳性对照组6只；蝙蝠葛活性成分低剂量组6只；蝙蝠葛活性成分高剂量组6只，共30只。

1.3 方法

取处于对数生长期的人肺癌A-549细胞制备细胞悬液，调整细胞浓度为1×107/ml，按每只裸鼠注射0.2 ml的细胞悬液计算，制备适量细胞悬液；用1 ml注射器在每只裸鼠右侧腋窝皮下注射细胞悬液0.2 ml，注射后轻压5 s：将裸鼠重新放回到笼中观察3～5天，以右侧腋窝皮下出现米粒大小质硬结节为模型复制成功的标准；接种成功后，在裸鼠体内传代2代以后使用；取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5 mm3左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠背部皮下，裸小鼠皮下移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径。

1.4 动物分组

待裸小鼠移植瘤生长至100～200 mm3后将动物进行随机分为4个组：阴性对照组(加入蝙蝠葛活性成分的药物溶剂Na2CO3)，为12只；阳性对照组(加入丝裂霉素)，为6只；蝙蝠葛活性成分低剂量组，为6只；蝙蝠葛活性成分高剂量组，为6只。

1.5 药物的用法

蝙蝠葛活性成分低剂量和高剂量组每天口服给药，连续给药4周；阳性对照组丝裂霉素第1，7天静脉给药两次；阴性对照组给等量的药物溶剂(Na2CO3)。给药剂量以及用法等参照表1。

表1 蝙蝠葛活性成分作用于裸鼠给药剂量、浓度及给药方式

1.6 抑瘤效果的观察

每周两次使用游标卡尺测量裸鼠移植瘤的长度和宽度，动态观察裸鼠移植瘤的生长情况，并计算其体积，以此绘出裸鼠移植瘤生长曲线图，同时称取小鼠的体重。

1.7 统计学处理

2 结果

蝙蝠葛活性成分对人肺癌A-549裸小鼠移植瘤的实验性治疗结果见表2～4。阳性对照组、丝裂霉素组的T/C值为6.0%，对裸小鼠移植瘤的生长具有显著的抑制作用；蝙蝠葛活性成分低剂量组的T/C值为68.4%，对裸小鼠移植瘤的生长无明显地抑制作用；蝙蝠葛活性成分高剂量组的T/C值为58.8%，并P<0.05,故可以认为对裸小鼠移植瘤的生长具有抑制作用。各实验组裸鼠生长情况良好，整个实验过程无裸鼠死亡，蝙蝠葛活性成分实验组体重均有增加，与对照组裸鼠无明显差异，丝裂霉素组体重相对较轻。

3 讨论

用化学药物治疗肿瘤仅仅是最近四十年的事，与手术治疗和放射治疗相比较，药物治疗的历史非常短。经过这四十多年的不断努力，科学家们已经发现了几十种有效的抗肿瘤药物，让很多晚期癌症病人的生存期明显延长[3]。但化疗药物的毒副作用也显而易见，导致相当一部分患者不得不停止治疗。这需要我们更多地深入研究和发觉新的资源并于以开发。寻找具有抗肿瘤作用，并且毒副作用小，能提高患者生活质量的药物。多数常见的实体瘤，比如肺癌、胃癌、肝癌以及胰腺癌等还缺乏有效的药物治疗，新型抗肿瘤药物的研究势在必行。 近年来，越来越多的研究认为蝙蝠葛具有广谱的抗肿瘤作用[4-5]。但大部分研究是体外实验。本实验用人肺癌A-549裸小鼠移植瘤来观察了蝙蝠葛活性成分在体内的抗肿瘤作用，发现蝙蝠葛活性成分低剂量组T/C值为68.4%，对裸小鼠移植瘤的生长无明显地抑制作用，高剂量组的T/C值为58.8%，并P<0.05,故可以认为蝙蝠葛活性成分高剂量组对裸小鼠移植瘤的生长具有抑制作用，并且实验组裸鼠生长情况良好，体重无明显减轻，并没有表现出明显毒性反应，而阳性对照组，丝裂霉素组小鼠体重相对较轻。我们发现蝙蝠葛活性成分在体外具有广谱的抗肿瘤细胞增殖作用，在体内也具有抗肿瘤作用，并无表现出明显的毒副作用，故可以认为蝙蝠葛活性成分具有进一步研究的价值，其抗肿瘤机制有待于进一步研究和探讨。

表2 各组裸鼠体重的变化

表3 各组裸鼠皮下移植瘤的平均体积

表4 各组裸鼠皮下移植瘤的相对肿瘤体积和相对肿瘤增殖率