邱秀容

深圳市龙华区人民医院(518109)

多囊卵巢综合征(PCOS)发病率5%～10%[1]，与癌症、2型糖尿病、心血管疾病有关[2]。肥胖女性更容易罹患PCOS[3-4]。有研究显示，miR-26b表达随脂肪细胞分化成熟而上调，且与胰岛素抵抗存在负相关[5-6]。但是PCOS者肥胖、糖脂代谢、miR-26b表达的关系仍无定论。本研究探究PCOS患者外周血清miR-26b的表达特点，分析miR-26b表达与肥胖和糖脂代谢的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年2月—2017年12月本院妇科就医的PCOS患者91例为研究对象(PCOS组)，诊断符合2003版鹿特丹PCOS诊断标准[7]。排除因其他疾病所致的雄激素增多症(如先天性肾上腺皮质增生症、库欣综合征等)；近3个月服用激素类药物。选择本院非PCOS就诊的不孕女性60例为对照组。PCOS组年龄(26.8±5.6)岁(18～40岁)，对照组年龄(25.0±6.9)岁(19～39岁)，两组年龄比较无统计学差异(P>0.05)。

1.2 miR-26b检测方法

两组对象均于月经周期第3～5d(闭经且排除优势卵泡及生理性囊肿者不限制采血时间)清晨采集空腹静脉血清， 2 h内完成各项检测。

1.2.1试剂与材料Trizol试剂购自美国Invitrogen公司，定量7500 PCR仪购自美国ABI公司，逆转录系统购自美国GIBICOL公司。引物合成由金斯瑞生物科技有限公司完成。

1.2.2RNA提取提取淋巴细胞，加1ml TRIzol试剂，室温放置5min后，2～8℃离心取上清，加入0.2ml氯仿振荡15s，室温放置3min，2～8℃离心15min，取无色水相层，异丙醇沉淀水相中RNA，2～8℃离心取沉淀物，75%乙醇洗涤RNA沉淀，2～8℃离心后弃上清，室温放置RNA沉淀物至干燥，紫外分光光度法鉴定RNA纯度和完整性。

1.2.3RNA反转录反应(RT-PCR)将RNA逆转录为cDNA，RT-PCR反应，行琼脂糖凝胶电泳，以U6作为miRNA的内参对照，紫外灯下观察结果。2-ΔΔCt法计算miR-26b相对表达量。RT-PCR反应条件：95℃ 30 s，95℃ 15 s，72℃ 15 s，共40个循环。

1.3 人体测量学指标及测量方法

测量受试者身高、体质量并计算体质量指数(BMI)，以 BM I≥25为肥胖[8]。

1.4 血糖、血脂指标

全自动化学发光免疫分析仪测定空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)(美国拜耳)，采用稳态模型法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。采用Synchron LX20 全自动生化检测仪(美国Beckman Coulter公司)检测三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 两组血清miR-26b的表达比较

血清miR-26b水平PCOS组(2.74±0.69)高于对照组(1.16±0.27)(P<0.05)，且PCOS组中合并肥胖患者血清miR-26b(44例，3.13±0.85)高于PCOS正常体重患者(47例，2.33±0.31)(F=10.305，P=0.000)。

2.2 PCOS组代谢指标与miR-26b

PCOS组中，合并糖脂代谢异常患者中血清、HOMA-IR、miR-26b水平均高于糖脂代谢正常患者(均P<0.05)，见表1。

表1 PCOS代谢与指标比较

2.3 miR-26b与肥胖及代谢指标的相关性分析

PCOS组 miR-26b与LDL-C、HOMA-IR 、BMI均呈正相关(r=0.510、0.616、0.456,P<0.05)，而对照组未发现相关性。见表2。

表2 两组不同检测指标相关性分析(r)

3 讨论

近年 PCOS 基因学研究发现，胰岛素信号传导过程及2 型糖尿病相关基因与PCOS 发病关系密切[9]。miRNA 在PCOS 中异常表达，其独特的转录后调控方式为PCOS发病机制研究提供新思路。miRNAs是单链非编码小分子RNA，具有高度保守和内源性，自身无生物学功能，通过与靶基因3’非翻译区互补配对结合转录，调控蛋白编码基因的表达。现有研究显示，miRNA参与脂肪细胞分化、胰岛素分泌、糖脂代谢的调控过程，同时可能参与胰岛素抵抗的发生[10]。已有研究报道，卵巢细胞中的microRNA通过作用于卵巢颗粒细胞，参与调节性腺发育、甾体类激素合成，促进卵细胞凋亡、排卵和黄体形成[11-12]。本研究PCOS患者外周血清miR-26b水平明显高于正常对照组，提示miR-26b在PCOS的发生机制中扮演了重要角色。

本研究PCOS合并肥胖患者血清miR-26b水平高于PCOS体重正常者，说明高表达的miR-26b是PCOS肥胖的主要促进因素。许伟伟[8]等研究显示，肥胖PCOS患者外周血清miR-26b的表达高于非肥胖PCOS患者，且控制体重后血清miR-26b下调，提示miR-26b可能参与了PCOS肥胖进程。本研究PCOS合并糖脂代谢异常患者血清miR-26b的表达高于代谢正常患者，提示miR-26b可能参与了PCOS糖脂代谢异常进程。而有文献[8]相关性分析显示，miR-26b与空腹胰岛素水平呈正相关，与睾酮无关，推测miR-26b可能参与了PCOS患者糖脂代谢异常进程。相关研究同样显示38%～88%的PCOS患者存在肥胖或超重，而肥胖、胰岛素抵抗与PCOS相互影响和作用，加速了病情的发展和恶化，因此肥胖的PCOS患者更易发生胰岛素抵抗[13]。而脂肪组织中miR-26b的异常表达与葡萄糖以及脂肪代谢异常有关[14-15]。本研究对PCOS患者外周血清miR-26b与肥胖、糖脂代谢指标的相关性分析显示，miR-26b与BMI、LDL-C、HOMA-IR均存在正相关，说明糖脂代谢异常、肥胖的发生均与miR-26b有关。

综上，miR-26b可能参与了PCOS的肥胖和糖脂代谢异常的进程，但调控机制尚不清楚。由于本研究未对miR-26b下游靶基因、作用途径进行研究， miR-26b在PCOS的发病机制仍有待进一步研究证实。