张庆桥,王一鹏,魏艳秋,米建华,赵 雪,孙立旦,宋勤叶

(1.河北工程大学生命科学与食品工程学院,河北 邯郸 056021；2.河北农业大学动物医学院 河北省兽用生物制品工程技术研究中心,河北 保定 071000；3.河北省涞水县畜牧水产局,河北 涞水 074199)

猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)甲型冠状病毒属(Alphacoronavirus)成员。该病毒引起的猪流行性腹泻(PED)是猪场常见的一种肠道传染病,以猪呕吐、腹泻、脱水和死亡为特征。1971年PED首次发生于英国的生长育肥猪群,1973年我国上海发生PED,随后该病主要以地方流行性形式在国内多地猪场发生[1]。但2010年秋冬以来,PEDV变异株引起的PED在国内暴发流行,初生仔猪的发病率和死亡率高达100%,给养猪场造成了巨大经济损失[2-4]。目前PEDV是导致仔猪腹泻的最重要的致病因子[5-6],此外,猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒猪δ-冠状病毒以及大肠杆菌等也是引起仔猪腹泻常见病原[5-6]。不同病原引起的临床表现相似,给临床诊断造成了很大困难。因此,研究高效特异的诊断试剂,建立快速检测技术,具有重要实践意义。

单克隆抗体(McAb)以其高特异性、高均一性、方便生产、容易标准化和商品化等优势,成为病原学或血清学检测技术、感染与免疫机制研究以及靶向治疗的理想工具。核衣壳蛋白是PEDV的主要结构蛋白,保守性高,在PEDV感染早期,细胞内N蛋白浓度高,是病毒感染早期诊断与监测的主要靶蛋白[7]。此外,N蛋白还与病毒致病以及机体的细胞免疫应答反应有关[8]。本研究旨在用体外表达的重组N蛋白作为免疫原,应用杂交瘤技术,获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备PEDV特异性单克隆抗体,为PEDV诊断或检测技术的进一步研发以及感染免疫机制的研究奠定基础。……