猪小肠微血管内皮细胞的分离培养与纯化

2019-05-21施晓杰马维超邓昱晨穆祥

中国兽医杂志 2019年1期

关键词：生长

施晓杰,马维超,邓昱晨,邓伟,张倩,冯波,穆祥

[1.北京农学院动物科技学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京昌平 102206；2.中国农业大学动物医学院,北京海淀 100193]

血管内皮细胞可调节机体内环境稳定,具有分泌、合成、代谢及免疫功能,可产生多种细胞因子和生物活性物质[1]。不同于大血管内皮细胞,在不同组织器官之间,微血管内皮细胞在表型和功能上均表现出差异性[2]。肠微血管内皮细胞衬附于肠绒毛血管内壁,呈网囊状,是血管内外物质交换的重要屏障和各种肠内毒素入血的必经通路。目前关于猪脑微血管内皮细胞的分离培养方法已有诸多报道,但是尚未有成熟的猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)分离方法的相关研究。因此本试验尝试采用酶消化法和免疫磁珠分选法,建立一套成熟的分离PIMVECs的方法。

1 材料

1.1 实验动物英系长白SPF新生仔猪,购自北京市SPF猪育种管理中心,实验动物生产许可证号：SCXK(京)2018—0007。

1.2 主要仪器和试剂 CO2培养箱(SANYO公司,MCO17AC)；多功能酶标仪(BIOTEK公司,SYNERGY4)；荧光倒置显微镜(OLYMPUS,IX71A21PH)；磁珠分选仪(Thermo公司,710)；澳洲胎牛血清(Gibco公司,1099141)；DMEM高糖培养基(Gibco公司,1930009)；青链霉素(Gibco,15140122)；胰蛋白酶(Sigma公司,03126)；I型胶原酶(Gibco公司,17100-017)；DAPI染色液(Bioss公司,C-0033)；WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(碧云天生物技术有限公司,C0035)；抗小鼠IgG磁珠(In-vitrogen公司,11531D)；小鼠抗猪CD31(Novusbio公司,10065336)；FITC标记羊抗兔IgG(Abbine公司,A23220)；兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体(CUSABIO公司,P00451)。