刘照琨,关靖喆,路丽群,于鹏成,刘明旭,吴丽佳,路义鑫

(东北农业大学动物医学学院 动物疾病防控技术与制剂创制重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150030)

旋毛虫病是一种危害严重的人兽共患寄生虫病,因生食或食用未煮熟含有感染性包囊的肉类食品而感染,呈全球性分布,危害严重[1]。丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,SPI)是一类对丝氨酸蛋白酶活性有抑制作用的蛋白质超家族。多个研究表明,寄生虫SPI不但能够通过调节蛋白酶活性影响蛋白质代谢参与凝血、炎症反应等许多生理和病理过程,而且也是生物体免疫系统的重要组成部分[2-4],旋毛虫SPI能够抵制宿主的免疫反应,在虫体与宿主相互作用中发挥着重要的作用。

佐剂常用来增强免疫效果,筛选适宜的佐剂尤为重要。为了探讨不同佐剂类型对两种SPIs(TsAd-SPI和TsKaSPI)的免疫效果的影响,本试验选取铝佐剂、Montanide ISA206和弗氏佐剂研究了其对BALB/c小鼠的免疫保护作用,为进一步研究SPIs与宿主的相互作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验动物及重组蛋白 试验用旋毛虫(Trichinella spiralis)T1分离株(ISS3),由东北农业大学寄生虫教研室用健康的昆明系小鼠持续传代保存。6～8周龄雄性BALB/c小鼠,购自辽宁长生生物公司；TsAdSPI和TsKaSPI重组蛋白由本实验室已成功构建的载体经IPTG诱导表达,纯化后获得。

1.2 主要试剂 弗氏佐剂(FCA/FIA)、铝佐剂(Alum)、IgG1、 IgG2a,均购自 Sigma Aldrich 公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG,购自北京中杉金桥生物技术有限公司；Montanide ISA 206佐剂,购自 Seppic公司；其他试剂,购自国内外生物公司。

1.3 试验分组及免疫程序 将60只6～8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为6组,每组10只,每种蛋白3组,分别为高剂量组、中剂量组、低剂量组,将纯化后的两种重组蛋白分别用PBS稀释后,以腹腔注射的方法免疫小鼠。……