徐 莉，李红梅

(江苏省宝应县市场监督管理局，江苏 宝应 225800)

1 引言

乌洛托品又名六次甲基四胺[1～3]，它由甲醛与氨水起化学反应而得。乌洛托品在pH值低于7的条件下容易分解出甲醛和氨，甲醛对人体有毒性，所以卫生部禁止在食品中检测出乌洛托品的残留。食品中乌洛托品含量经常使用的检测方法就是比色法和色谱法，液相色谱法在检测机构用应用广泛。本文采用液质串联四级杆联用检测米粉中乌洛托品残留量，方法回收率较高，适用于米粉中乌洛托品残留量的测定。

2 材料与方法

2.1 材料和仪器

乌洛托品标准品(农业部环境保护科研检测所)；米粉(农贸市场购买)；甲醇、乙腈(色谱纯)(美国默克公司)；乙酸胺、正己烷、硫酸钠(分析纯)；超纯水；MCX-SPE固相萃取柱(天津博纳艾杰尔科技有限公司)；美国安捷伦液相色谱串联四级杆质谱联用仪1290-6410B。

2.2 实验方法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：C18 CAPCELL Pak 1∶4(50 mm×2.1 mm；1.5 μm)；流动相：乙腈+1%乙酸水溶液体积比例为80∶20，设定流动相流速为0.2 mL/min；样品进样量：1 μL。

2.2.2 质谱条件

电喷雾离子源(ESI)：正离子模式，离子检测模式为多反应监测模式，选择监测乌洛托品的母离子峰及子离子峰，即m/z 141.1母离子和m/z 112.2子离子。解离电压：100 V，干燥气流速为10 L/min，离子源温度：350 ℃，碰撞能：20 V，雾化电压：45psi，毛细管电压：4000 V。

2.2.3 标准溶液配制

用十万分之一电子天平正确称取乌洛托品标准品0.1 mg，用乙腈配成10,20,40,80,100ng/ mL 5个浓度点。

2.2.4 样品制备

称取约5 g样品于50 mL离心管中，加入2 g无水硫酸钠及20 mL乙腈，均质，离心，上清液加入乙腈饱和的正己烷溶液10 mL，震荡离心后，弃去上清液，乙腈相过无水硫酸钠，然后浓缩近干后待净化。经MCX固相萃取柱净化后，经过45 ℃下氮气吹干，残渣用1 mL乙腈溶解，过滤膜供液相色谱-串联质谱仪测定。

3 结果与讨论

3.1 流动相选择

实验中比较了不同流动相对乌洛托品分离效果的影响。乙腈-乙酸水相跟甲醇-乙酸水流动相进行了比较，乙腈-1%乙酸水作为流动相，保留时间较短，分离度好，能够达到实验要求，而且配制比较简便。在乙腈-1%乙酸水相中逐步提高乙腈比例，乙腈达到体积比为80∶20的时候，分离度和峰形较好，所以选择乙腈-1%乙酸水=80+20作为本次实验的流动相。

3.2 质谱条件的选择

乌洛托品分子式C6H12N4，相对分子质量为140.1，在ESI源中容易得到一个氢而带正电荷，因此选择电喷雾离子源正离子模式对其进行检测。在正离子模式下，对仪器的条件进行了优化，解离电压、干燥气流速、碰撞能、雾化电压等，乌洛托品质谱图和MRM图如图1、图2，因此乌洛托品定性定量采用母离子(m/z 141.1)和子离子(m/z 112.2)扫描，外标法定量。

3.3 样品前处理

实验中比较了NH2-SPE萃取柱、C18-SPE萃取柱、MCX-SPE萃取柱，发现MCX-SPE柱子处理能够较好的去除样品中的杂质，效果比较好，本实验选用MCX-SPE固相萃取柱，本实验方法能够获得较好的回收率和重现性。

3.4 方法的线性范围、精密度、回收率和最低检出限

乌洛托品1 μg/mL的标准储备液逐级稀释成浓度为10、20、40、80、100 ng/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。如下图3所示，回归方程为：y=246.1733x+312.241493，相关系数r2为0.997。在10～100 ng/mL之间线性关系良好。

图1 乌洛托品ESI(+)质谱图

以未检出乌洛托品的样品为空白样品，在空白样品中分别添加0.5、1、10 μg/kg 3个水平的空白加标样品进行了回收率实验，每个做5次平行试验，得到平均回收率跟相对标准偏差见表1，并以信噪比等于3为标准，测得乌洛托品的检出限(LOD)为0.3 μg/kg，以信噪比等于10时计算定量限(LOQ)为5 μg/kg。说明此方法的回收率和精明度能够达到实验要求。

图2 乌洛托品MRM质谱图

图3 标准曲线

表1 回收率实验

3.5 样品测定

根据本实验建立的方法对实际米粉进行检测分析，乌洛托品标准品色谱图见图4，乌洛托品标准品出峰时间在0.8 min左右，从图中可以看出，乌洛托品分析时间很短，只需4 min之内就能完成一个样品的检测。

图4乌洛托品标样质量色谱

4 结论

研究建立了米粉中乌洛托品含量的高效液相色谱-串联质谱检测分析方法。样品经过提取和C18-SPE柱子净化后，进液相串联四级杆质谱仪检测，检测结果表明乌洛托品在米粉中平均加标回收率为82.3%～90.2%，RSD为2.95%～6.52%，最低检出限为0.3 μg/kg。该方法回收率较高，准确度较好，分析简便快捷，能够达到实验要求。