皮凤娟 张庆莲 黄娟 邵单炫 廖光辉

摘要：目的 采用多指标综合评价的方法，为真方白丸胶囊提供质量控制的方法和依据。方法 采用薄层色谱法（TLC）对制剂中的天麻、枳壳进行定性研究;采用高效液相色谱法（HPLC）测定真方白丸胶囊中天麻素的含量;采用紫外分光光度法测定真方白丸胶囊中总胆酸的含量。结果 薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰，天麻素在0.13～2.60μg（r=0.9999），鹅去氧胆酸在0～0.167μg（r=0.9999）范围内线性关系良好，平均回收率分别为99.98%，99.57%，RSD分别为0.202%（n=9）、2.890%（n=6）。结论 该方法简便、灵敏度高、重复性好，能用于该制剂的质量控制。

关键词：真方白丸胶囊;总胆酸;天麻素

中图分类号：R927 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2019）01-0066-04

真方白丸为元代《瑞竹堂方》所裁，主要药物有川乌头、白附子、半夏、天南星、天麻、全蝎等，主治中风病之半身不遂，于明代中叶失传[1-2]。目前，该方被发掘出来后即受到学术界的普遍重视，已成为治疗中风急性期中经络的一个主要方剂。现根据方中药物特性，已将其制备成真方白丸胶囊，为保证该制剂的质量可控性和稳定性，本实验参考《中国药典》（2015年版一部）对制剂中的天麻，枳壳等进行了薄层定性鉴别，采用高效液相色谱法对君药天麻有效成分天麻素测定了含量，采用紫外分光光度法测定了制剂中的总胆酸的含量，并进行方法学研究。

1 仪器与材料

胆南星（购自内江良辉药业有限公司，）FA2004型电子天平（上海安亭电子仪器厂）;ZDHW调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）;紫外分光光度计;恒温水浴锅;鹅去氧胆酸对照品（中国药品生物制品检定所）;天麻素对照品（中国药品生物制品检定所），橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所）。所用试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 天麻素含量测定方法的建立

2.1.1 色谱条件 美国赛分 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;以乙腈：0.05%磷酸（3：97）为流动相;流速为1 mL/min;检测波长为220 nm，进样量为10 μL;柱温30℃[3-5]。

2.1.2 溶液的制备 供试品溶液制备：取真方白丸胶囊10粒，取出内容物，精密称取混合粉末0.8 g，精密加入25 mL稀乙醇，称定，超声处理30 min后再次称定，用稀乙醇补足减失的重量，过滤，精密量取续滤液10 mL，水浴蒸干，残渣用流动相溶解并定容至25 mL，即得。

对照品溶液制备：精密称取天麻素对照品6.5 mg，置于50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀;即得对照品溶液。

阴性对照品溶液：按处方量比例称取除天麻外的混合药粉，按照供试品溶液制备的方法，制备缺天麻的阴性对照溶液。

2.1.3 专属性实验 分别精密吸取天麻素对照品溶液，供试品溶液，缺天麻阴性对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件检测。结果对照品溶液和供试品溶液在相同的保留时间均有出峰，阴性对照无干扰。说明该测定方法专属性强，无干扰。

2.1.4 线性范围考察 精密称取天麻素对照品适量，用甲醇稀释制成含天麻素对照品0.0130 mg/mL～0.2600 mg/mL的溶液，在上述色谱条件下，分别取混合对照品溶液10μL注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=1381.8x+0.0536（r=0.9999）。结果表明：天麻素在0.13-2.60 μg内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.1.5 精密度实验 吸取2.1.2项下样品溶液适量，重复测定6次，结果天麻素峰面积的RSD值为1.64%，表明该方法精密度良好。

2.1.6 稳定性实验 精密量取2.1.2项下混合对照品溶液，在0，2，4，6和8h分别进样10 μL，记录峰面积，计算RSD为0.73%，结果表明天麻素在8 h内稳定。

2.1.7 重复性实验 取同一批样品6份，照2.1.2项下方法制备供试品溶液，依照上述色谱条件平行操作测定，记录峰面积，计算含量。结果RSD值小于1.0%，表明本方法的重复性良好。

2.1.8 耐用性实验 取同一批样品，照2.1.2项下方法制备供试品溶液，改变色谱柱温度±5℃、流动相比例±5%，流速±2%，进行耐用性試验。结果RSD<3.0%，说明本方法稳定。

2.1.9 加样回收率实验 精密量取已知天麻素含量的样品0.3 g，共9份，分别置于具塞锥形瓶中，每份按高、中、低浓度加入对照品。照2.1.2项下方法制备供试品溶液，依照上述色谱条件平行操作测定，记录峰面积，计算回收率，结果RSD<3.0%，说明加样回收率好。结果见表1。

2.1.10 含量测定 取3批真方白丸胶囊，依法制备供试品液并测定天麻素的含量。3批真方白丸胶囊天麻素平均含量为3.32mg·g-1。

2.2 UV法测定总胆酸含量

2.2.1 溶液的制备 对照品溶液：取鹅去氧胆酸对照品5.02 mg置10 mL量瓶中，用冰乙酸溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。分别精密移取对照品储备液适量至10 mL量瓶中，加冰乙酸稀释至刻度，制成50.2 μg·mL-1和2.51 μg·mL-1的对照品溶液[6-8]。

供试品溶液：取真方白丸胶囊0.4 g，置锥形瓶中，加入10 mL乙酸乙酯，水浴加热回流150 min，加入0.6 g活性炭，再加热回流30 min，过滤，蒸干，残渣加60%冰乙酸溶液溶解并稀释至10 mL，取1 mL稀释液加入14 mL 50%硫酸溶液，摇匀后于75℃水浴10 min，立即冰浴2 min，即得。