韩鹏， 吴学举， 杨明义， 李家勇

毕节市第一人民医院耳鼻喉科(贵州毕节 551700)

梅尼埃病是一种内耳疾病，在医学临床上较为常见，目前梅尼埃病病因尚未明确，有专家提出是由于膜迷路积水造成，主要临床症状表现为旋转性的眩晕、听力损伤、耳鸣、耳胀等[1-2]。研究发现，梅尼埃病可能与多种抗原具有相关性，髓鞘PO蛋白因为和周围的神经系统有关，造成一些神经系统疾病。PO蛋白是一种糖蛋白，是免疫球蛋白家族中的一员，主要集中分布于哺乳动物的神经系统细胞膜以及内耳的听觉神经纤维和神经节上[3]。PO蛋白是髓鞘神经的重要组成成分，对神经细胞的生长和信息的传递有重要的促进作用，还可以结合抗体对自身免疫性耳病患者产生免疫反应，造成髓鞘神经发生病变，导致疾病的发生[4]。2016年11月至2017年10月，本研究通过建立梅尼埃病模型大鼠，随机分为模型组、培他啶组和联合组，分别采用前庭神经抑制剂苯海拉明和培他啶治疗，分析对梅尼埃病模型大鼠治疗效果及对大鼠PO蛋白抗体的影响，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 健康大鼠36只，雄性，鼠龄3～6个月，平均(4.5±1.2)个月，体质量140～250 g，平均(165.5±20.3)g。所有大鼠均饲养在干净的动物笼里，室温在(21.5±1.5)℃，相对湿度40%～45%，光照时间明12 h,暗12 h，饮用纯净水，按照常规的方法进行饲养1周。纳入标准：所有大鼠均无用药史；经过耳镜观察双耳的外耳道和耳膜均完整、健康；耳廓反射灵敏，没有眼震反应。所做实验均获得我院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 大鼠梅尼埃病模型建立 采用自身免疫法建立大鼠梅尼埃病模型。在常规免疫的基础上，第1次使用0.5 mg的同种粗制内耳抗原(ICIEAgs)，0.25 mL的加弗氏佐剂；第2次使用剂量为0.25 mg的ICIEAgs，0.25 mL的加弗氏佐剂进行强化免疫，每次的时间间隔为5 d；使用剂量为0.02 mg的ICIEAgs，0.02 mL的加弗氏佐剂进行局部淋巴囊免疫。注射采用多位置点皮下注射，分别在大鼠后足、背部和腹部进行。模型建立成功的标准为大鼠出现眼震、摆头、走路不稳、脑干听力听阀值下降等，满足其中一项就算符合。

1.2.2 治疗及操作 建模成功的大鼠共计30只，随机分为模型组、培他啶组和联合组，各10只。模型组大鼠给予常规饲养生理盐水灌胃；培他啶组大鼠在模型组的基础上给予培他啶治疗，培他啶剂量4 mg/mL；联合组在模型组基础上给予大鼠苯海拉明联合培他啶治疗，苯海拉明剂量10 mg/mL；3组大鼠的给药方式均为鼓膜直接注射到鼓室位置，剂量为0.1 mL，一次完成，操作均在显微镜下进行。

1.2.3 大鼠听觉听阀检测 选择环境在具有隔音功能的听力室，在大鼠腹腔的位置，采用85 mg/kg水合氯醛溶液进行麻醉，之后将大鼠固定在动物的手术台上，当大鼠进入深度麻醉时，在无菌操作下使用专用电极，刺入大鼠体内。强度80声压级，频率为10次/s,波次100～3 000 Hz,时程20 ms,将耳机固定在大鼠外耳道的0.5 cm处。

1.2.4 免疫透射比浊法检测PO蛋白水平 将待测大鼠用乙醚麻醉后，断头处死，在大鼠腹部刮毛抽血2 mL，加入20倍体积的离心缓冲液，手动均浆10 min，用离心机以1 000 r/min的转速分离，取上层血浆电动匀浆后，用离心机以2 000 r/min的转速分离，取上层血浆放置-70℃的环境中冻存，待用。将待测标本放入特定蛋白分析仪中抗原抗体结合，形成复合物，经过一定时间反应观察浊度。采用比浊计测定光的密度值，分析PO蛋白水平。

1.2.5 化学发光分析法检测PO蛋白抗体IgM、IgG浓度 待测标本加入化学发光物质，与催化剂发生催化反应，与氧化剂发生氧化反应，形成处于激发状态的中间体，当中间体达到稳定时，会发射出光子，严格按照化学发光分析仪操作步骤，利用发光信号测量仪测量光子数值，对比分析IgM、IgG浓度。

1.2.6 酶联免疫吸附法检测血管加压素浓度 将待测的标本和酶标物严格按照ELISA试剂盒说明书操作步骤与固相载体产生反应作用，将固相载体反应的复合物经过洗涤与其他物质分离，加入酶反应底物，经过酶的催化作用形成有色物质，根据颜色的深浅进行定性或定量分析血管加压素浓度。

2 结果

2.1 3组大鼠治疗前、后听觉听阀比较 治疗前3组大鼠听觉听阀比较差异无统计学意义(P>0.05)。培他啶组和联合组两组大鼠治疗后听觉听阀显著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后联合组大鼠听觉听阀显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

项目n听阀治疗前治疗后模型组1054.22±7.93培他啶组1053.66±6.8945.69±5.25联合组1053.78±6.6637.85±4.89F值0.575.17P值>0.05<0.05

2.2 3组大鼠治疗前、后PO蛋白水平比较 治疗前3组大鼠PO蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。培他啶组和联合组两组大鼠治疗后PO蛋白水平显著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后联合组大鼠PO蛋白水平显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 3组大鼠治疗前、后PO蛋白抗体浓度比较 治疗前3组大鼠PO蛋白抗体IgM、IgG浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。培他啶组和联合组两组大鼠治疗后PO蛋白抗体IgM、IgG浓度显著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后联合组大鼠PO蛋白抗体IgM、IgG浓度显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

项目nPO蛋白治疗前治疗后模型组1050.33±17.63培他啶组1050.66±16.8930.69±9.25联合组1050.78±16.6620.85±6.89F值0.034.04P值>0.05<0.05

项目nIgMIgG治疗前治疗后治疗前治疗后模型组1037.44±14.8440.36±15.29培他啶组1036.78±13.6930.54±10.6740.02±14.8930.78±12.56联合组1036.88±13.9620.88±10.3039.96±14.9820.66±9.89F值0.034.160.003.03P值>0.05<0.05>0.05<0.05

2.4 3组大鼠治疗前、后血浆中血管加压素浓度比较 治疗前3组大鼠血浆中血管加压素浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。培他啶组和联合组两组大鼠治疗后血浆中血管加压素浓度著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后联合组大鼠血浆中血管加压素浓度显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

项目n血管加压素浓度治疗前治疗后模型组106.15±0.46培他啶组106.06±0.565.55±0.36联合组106.18±0.543.81±0.54F值0.0512.71P值>0.05<0.05

3 讨论

我国是中内耳疾病的高发国家，发病率已达到4%，并且在逐年提高，严重损害人们的健康。梅尼埃病是临床上最常见的一种中内耳疾病，病理特征为膜迷路积水，临床症状主要表现为眩晕，伴随听力损伤甚至消失，目前其发病的主要机制并不明确，说法不一[5-6]。目前对中内耳疾病的治疗主要是给予糖皮质激素，但是外淋巴系统屏障会阻碍药物到达中内耳组织中，所以为了能够达到位置，经常会选用大剂量的药物浓度。但是会产生不良反应，同时也不能给高血压、糖尿病、胃溃疡患者用药，传统意义上的用药存在着一些弊端和局限性，不能更好地发挥其作用[7-8]。因此，鼓室内局部注射用药治疗中内耳疾成为研究的热门，怎样保持长时间的高剂量供药，也是研究的重点。常规的供药方式主要包括在鼓室直接给药，安装给药装置等，各有各的不足之处。根据张焕等[9]提出的具体要求，总结为以下几点：要具有较好的缓释效果，能够长时间的供药；局部供药的浓度保持一致，时间长，在鼓室中能够长时间起作用；方法要简单便捷，减轻患者的痛苦。

本研究中，培他啶组和联合组两组大鼠治疗后听觉听阀显著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；对选取建模成功的大鼠进行药物治疗，通过电位测定来评价大鼠的听力状况，说明听力听阀值高，大鼠听力差，两种药物治疗均可以降低大鼠的听阀值。治疗后联合组大鼠听觉听阀显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。说明前庭神经抑制剂联合培他啶可以改善大鼠的听力，联合治疗优于单用一种药物治疗。研究发现，PO蛋白抗体是一种髓鞘蛋白，PO蛋白抗体的基因发生变异和周围神经系统病变有联系[10]。培他啶组和联合组两组大鼠治疗后PO蛋白水平及其抗体IgM、IgG浓度显著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后联合组大鼠PO蛋白水平及其抗体IgM、IgG浓度显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。血管加压素也叫抗利尿激素是一种9肽激素，主要分泌的场所是下丘脑的视上核和核神经细胞，被释放的主要途径要通过下丘脑的巨细胞的神经细胞的轴突末端，在垂体的后叶集聚保存[11]。血管加压素主要是通过V1、V2、V3受体亚型进行生理调控，V2受体主要是在肾脏集合小管集中分布，通过G蛋白和腺苷环化酶相互作用，当V2受体受到刺激会场所兴奋，细胞内腺苷环化酶含量会增加，加上蛋白激酶A和水通道蛋白的共同作用，会促进身体中的水分加快吸收，从而产生抗利尿的作用[12]。所以说渗透压的稳定具有重要的意义。结果显示，培他啶组和联合组两组大鼠治疗后血浆中血管加压素浓度著低于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后联合组大鼠血浆中血管加压素浓度显著低于培他啶组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。说明前庭神经抑制剂联合培他啶可以改善大鼠血管加压素浓度，降低其水平,这一结果与陈晓明等[13]研究保持一致。血浆中的渗透压增加，血管加压素浓度也会随之增加，水的再吸收利用作用也会增加，会造成血液容量和血压上升。研究显示，给予大鼠连续注射1周的血管加压素，大鼠的内耳淋巴会形成积水，而在内耳淋巴会形成积水的大鼠模型中，血管加压素的浓度和梅尼埃病患者体内的血管加压素浓度保持一致[14-15]。当梅尼埃病患者急性发病时，患者体内的血管加压素的浓度会急剧上升，所以说，血管加压素水平是引起梅尼埃病的重要原因。

综上所述，本研究通过建立梅尼埃大鼠模型，分析前庭神经抑制剂联合培他啶的疗效，得出前庭神经抑制剂联合培他啶治疗大鼠梅尼埃病，可以降低PO蛋白抗体IgM、IgG浓度，改善大鼠听力，治疗效果显著，值得在医学临床上做更深的研究。