娄红军 颜泽清 宋珍华

项目编号：2017GABJC21

天然中草药已成为国内外饲料添加剂研究的热点，是具有中国特色的绿色饲料添加剂。中草药饲料添加剂是指以中草药的物性、物味、物间关系等传统中医药理论为主导，辅以动物饲养和饲料工业等现代化科学理论技术而制成的纯天然饲料添加剂；中草药添加剂中的免疫活性物质能提高机体免疫机能、抗应激、抗病、改善动物生产性能,且具有无残留、不易产生耐药性等优点,同时还含有多种营养成分和生物活性物质，兼有药物和营养的双重作用。为此，我们根据犬的生理及现代中草药药理研究抗高原反应的科研成果，按中医理论组方，研制出纯中草药添加剂，主要成分包括：红景天、黄芪、当归、玫瑰花等。

经反复试验证明，该中草药添加剂有活血止血、补气固表，增强造血功能，增强机体免疫功能、抗缺氧、促进血液循环及新陈代谢的作用，能降低高原反应对犬的影响。为了验证其安全性，特做如下试验。

一、材料与方法

（一）中草药添加剂

中草药添加剂主要由红景天、黄芪、当归、玫瑰花等多味中药材按比例精制成粉末状。

（二）试验动物

试验用小白鼠，体重为19 ～20g左右；大白鼠，体重为150g 左右，由南京中医药大学实验动物中心提供，SPF 级，雌雄兼用，按性别分笼饲养，食固体饲料，自由饮水，室温20 ～25℃，相对湿度45%～52%。

二、试验方法

（一）急性毒性试验

取小白鼠20 只，分成试验组和对照组，雌雄各半，分笼饲养，每笼5 只，共4 笼。常规饲养3d后开始试验，将中草药添加剂经口投服于试验组小白鼠，最大服量为0.375g/20g/次，3 次/d；对照组等量固体饲料，连续服用7d。给药后立即观察小白鼠的反应情况，连续观察7 天，记录小白鼠的外观、行为、精神、饮食、大小便、分泌物以及死亡等情况。实验结束时，处死所有小白鼠进行尸体剖检，取其内脏进行病理组织学检查。

（二）亚急性毒性试验

1.分组及试验条件

取50 只大白鼠随机分成5 个组，第5 组为对照组，每组10 只，雌雄各半。大白鼠禁食20h 后，经口投服中草药饲料添加剂，投服量1～4 组分别为1.5g、1.125g、0.75g、0.375g，每天分3 次口服，对照组给予等量固体饲料，连续7d。各组均采用相同的饲养管理方式，在饲养过程中，对其进行观察，并记录各组大白鼠的毒性反应及死亡情况。

2.大白鼠生长体重的测定

试验期间，每15 天称重1 次。

3.大白鼠血液生理生化指标的检测

在灌服添加剂的第30 天断尾采血，进行红细胞、白细胞计数，血红蛋白、白蛋白、总蛋白含量测定，以及对碱性磷酸酶、谷丙转氨酶、尿素氮与血清胆固醇活性的测定，除红细胞和白细胞分类计数外，其余指标均采用MD-100 自动生化分析仪检测。

4.病理组织学变化特征

实验过程中剖检死亡和濒死大白鼠，以及实验结束时处死所有大白鼠进行剖检，取其内脏进行病理组织学检查，首先用肉眼观察剖检变化，然后取心、肺、肝、肾、肠等组织，用10%福尔马林固定，常规脱水，透蜡，石蜡包埋，切片，H.E染色，光镜观察。

5.数据统计处理

用t 检验法分析组间差异。

三、结 果

（一）急性毒性试验

通过7d 喂养试验，56.25g/kg体重的中草药添加剂给小白鼠灌胃，试验中所有小白鼠活动正常，行为、精神、饮食、大小便、分泌物等无异常，也未见死亡。小白鼠反应灵敏，呼吸平稳。小白鼠精神状况正常，采食量、增长率与对照组相比,均无显著性差异(P＞0. 05)。试验结束时处死小鼠，解剖肉眼观察主要脏器颜色及形态学改变，结果心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见异常。据此，中草药饲料添加剂经小白鼠灌胃给药1日最大给药剂量56.25 g/kg，未见明显急性毒性反应，表明该制剂安全无毒。

表1 7d 小白鼠喂养试验情况

表2 大白鼠试验详细情况

表3 喂养30d 后的大白鼠血液生理生化指标

(二 )亚急性毒性试验

1.大白鼠基本状况

试验中，多数大白鼠于经口投服后精神状况、活动正常，反应灵敏，呼吸平稳，高剂量组稍有行动迟缓的情况，15 分钟后恢复正常。急性毒性大鼠经口大于或等于10000mg/kg，没有出现副作用和不良反应。喂养15d、30d 时,试验组大白鼠平均日增重0.3275g，对照组平均日增重0.32g；处理组与对照组的体重均无显著性差异(P＞0.05)（见表2）。内脏经组织病理学检查，无任何异常病变。

2.大白鼠血液生理生化指标的检测

从表3 可以看出（见表3），喂养30d 的大白鼠，红细胞、白细胞以及血红蛋白略有上升，其他指标均无明显变化，与对照组相比，差异均不显著(P＞0.05)。说明灌服中草药饲料添加剂对机体血清酶的活性与生理指标均无显著影响。

3.组织学观察

试验结束脏器处理后光镜观察心、肺、肝、肾、肠等，未见明显异常。

四、讨 论

我们针对犬高原反应的特点和中草药的作用机理，对传统中草药经现代药理学研究筛选，研制出对犬高原反应具有预防和治疗作用的中草药添加剂。方中主要成分包括：红景天、黄芪、当归、玫瑰花等中草药，以红景天为君药起主要作用，辅助其他各味以活血止血、补气固表，增强免疫、抗缺氧之功效。

急性毒性试验中，中草药添加剂经小鼠口服的1日最大量56.25g/kg，相当于一头工作犬(30kg)用量的281倍，没有出现副作用和不良反应；结果表明该中草药饲料添加剂对犬等动物基本无毒害作用 。

从亚急性毒性试验结果可以看出，中草药添加剂可使大白鼠的红细胞、白细胞、血红蛋白的数量有所增加，体重平均日增重0.3275g，说明该中草药添加剂具有增强机体免疫力和促进动物生长的作用，这主要是中草药中含有的苷类、多糖类、氨基酸和动物所需的转化酶等免疫活性物质能活化机体的免疫系统。这些物质从不同环节激发免疫应答，其中包括增强机体免疫功能，抗缺氧，促进血液循环及新陈代谢的作用。