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1.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002； 2.新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046

白麻属大叶白麻(PoacynumhendersoniiWoodson)喜生于盐碱荒地、沙漠及戈壁荒滩等干旱地区，主要分布在新疆、青海、内蒙、甘肃等地区，其中新疆罗布泊、塔里木河、孔雀河畔及阿克苏地区有丰富的大叶白麻野生资源[1-2]。《维吾尔药志》记载大叶白麻清热凉血、利尿消肿、行气凉肝、镇静安神，用于头晕、心悸、神经衰弱、高血压及肝硬化引起的腹水[3]。有学者认为，大叶白麻和罗布麻药理活性相似，金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷等黄酮类成分是二者的主要活性成分。然而，近年研究表明，二者在化学组成上有较大差异[4-9]，比如罗布麻中金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷的含量均高于大叶白麻，并且二者特征成分不同，大叶白麻含白麻苷、芦丁、biapigenin和加贯叶金丝桃素，罗布麻则含querciturone、乙酰金丝桃苷、穗花衫双黄酮等成分[8-10]。大叶白麻总黄酮由大叶白麻经乙醇提取、大孔树脂柱纯化制得，其抗炎活性优于罗布麻总黄酮[11]，白麻苷作为其主要成分含量达11.98%，另有研究报道白麻苷具有抗氧化、脑缺血保护等作用[12-13]。因此，本实验以白麻苷为考察指标，研究大叶白麻总黄酮在大鼠体内的药代动力学特征，以期为大叶白麻的开发利用提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 U3000高效液相色谱仪(Thermo)，MIKRO 220R冷冻离心机(Hettich)，XH-C涡旋混合器(江苏金怡仪器科技有限公司)，DT2012电子天平(余姚市金诺天平仪器有限公司)，AB265-S分析天平(梅特勒-托利多公司)，JY92-2D超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 白麻苷(批号：P09J6R1，上海源叶生物科技有限公司)，大叶白麻(新疆)，甲醇、乙腈为色谱纯(Sigma)，超纯水(自制)。

1.3 动物 SPF级SD大鼠10只，雄性，体重为(200±20)g，新疆维吾尔自治区实验动物研究中心，生产许可证号：SCXK(新)2016-0001。

2 方法

2.1 大叶白麻总黄酮制备 大叶白麻用20倍60%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，合并2次提取液，浓缩至无醇，过大孔树脂柱，水洗除杂后，以3BV 60%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，HPLC检测黄酮含量[14]。

2.2 大鼠血浆中白麻苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：XTARRA RP18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈：0.2%磷酸水溶液梯度洗脱(0～10 min，15%∶85%；10～50 min，18%∶82%；50～65 min，18%∶82%)；柱温：35℃；流速：1 mL/min；检测波长：360 nm；进样量：100 uL。

2.2.2 对照品溶液制备 精密称取白麻苷对照品适量，于10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容，制成浓度为97.0200 mg/L的储备液。分别精密吸取储备液适量，用50%甲醇稀释，制成浓度为97.0200、48.5100、24.2550、19.4040、9.7020、4.8510、2.4255、1.2128、0.6064、0.3032 mg/L的系列对照品溶液，4℃保存，备用。

2.2.3 血浆样品预处理 精密吸取大鼠血浆100 μl，加入200 μL甲醇沉淀蛋白，涡旋2 min，13000r/ min离心10 min，取上清过0.22 μm的微孔滤膜，即得。

2.2.4 专属性 将空白血浆、白麻苷添加血浆、灌胃大叶白麻纯化物后血浆，按“2.2.3”项下方法处理，按“2.2.1”项下色谱条件进样，考察方法专属性。

2.2.5 线性关系考察 精密吸取100 μL大鼠空白血浆10份，于1.5 mL的离心管中，分别加入25 μL系列标准溶液，配制成白麻苷浓度为19.4040、9.7020、4.8510、3.8808、1.9404、0.9702、0.4851、0.2426、0.1213、0.0606 mg/L的血浆样品，按“2.2.3”项下方法处理，按“2.2.1”项下色谱条件进样，以峰面积为纵坐标，血药浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.2.6 精密度实验制备 白麻苷浓度分别为0.4851、3.8808、19.4040 mg/L的血浆样品(n=5)，按“2.2.3”项下方法处理，按“2.2.1”项下色谱条件进样，连续3 d，分别计算日内RSD和日间RSD。

2.2.7 准确度实验制备 白麻苷浓度分别为0.4851、3.8808、19.4040 mg/L的血浆样品(n=5)，按“2.2.3”项下方法处理，按“2.2.1”项下色谱条件进样，以标准曲线计算浓度和相对回收率。

相对回收率=测定量/实际添加量

2.2.8 基质效应和提取回收率实验 制备白麻苷浓度分别为0.4851、3.8808、19.404 mg/L的血浆样品(n=5)，按“2.2.3”项下方法处理，按“2.1.1”项下色谱条件进样，峰面积为SET3。取空白血浆，按“2.2.3”项下方法处理，取上清液后加入对照品溶液，使其浓度与SET3一致(n=5)，按“2.2.1”项下色谱条件进样，峰面积作为SET2。将对照品溶液用50%甲醇溶液稀释，使其浓度与SET3一致，按“2.2.1”项下色谱条件进样，重复5次，峰面积作为SET1。

基质效应=SET2/SET1提取回收率=SET3/SET2

2.2.9 稳定性实验 制备白麻苷浓度分别为0.4851、3.8808、19.4040 mg/L的血浆样品(n=3)，室温下放置24 h后测定，考察短时稳定性。于-20℃冰冻30 d后取出后测定，考察长期稳定性。

2.3 药代动力学实验 雄性SD大鼠10只，灌胃给药前禁食不禁水。4只大鼠作为空白，6只大鼠灌胃大叶白麻总黄酮(1.05 g/kg，按白麻苷折算给药剂量为125.79 mg/kg)，灌胃体积10 mL/kg，于给药前后0、5、10、20、30、45 min、1、2、3、4、6、8、12 h眼眶后静脉丛取血0.5 mL，置于1.5 mL已肝素化的离心管中，13000r/ min离心10 min，分离得到血浆，-20℃保存。

2.4 数据处理 数据均用Excel处理，表示为(x±s)，药动学参数采用 PK solution 2.0TM(Summit Research Services，USA)药代动力学软件分析。

3 结果

3.1 大叶白麻总黄酮含量测定 HPLC检测，大叶白麻总黄酮中白麻苷、异槲皮苷、紫云英苷、芦丁和金丝桃苷的含量分别为11.98%、7.44%、0.67%、0.30%和0.14%。如图1所示。

3.2 大鼠血浆中白麻苷的含量测定

3.2.1 专属性 白麻苷的保留时间为19.793 min，分离度>9，理论塔板数>10000，拖尾因子均符合测定要求，空白血浆中内源性物质不干扰白麻苷的含量测定。如图2所示。

3.2.2 线性关系考察 白麻苷在0.0606～19.4040 mg/L的范围内线性关系良好，回归方程为Y=0.1290869X-0.0310899(R=0.9996)。如图3所示。

3.2.3 精密度实验 低、中、高3个浓度的血浆样品，日内RSD分别为1.53%、1.07%和3.62%，日间RSD分别为8.33%、3.56%和4.03%，方法精密度良好。

3.2.4 准确度实验 低、中、高3个浓度的血浆样品，平均相对回收率分别为102.29%、92.95%和90.11%。见表1。

表1 准确度实验结果

3.2.5 基质效应和回收率实验 白麻苷检测基本不受基质干扰，平均提取回收率为97.91%，符合生物样品检测要求。见表2、表3。

表2 大鼠血浆中白麻苷的基质效应

表3 大鼠血浆中白麻苷的提取回收率

3.2.6 稳定性实验 ”低、中、高3个浓度的血浆样品，室温下放置24 h后测定RSD分别为4.10%、4.08%和4.26%，-20℃冰冻30 d后测定RSD分别为3.93%、3.56%和3.69%，血浆样品短时、长期稳定性良好。

3.3 药代动力学实验 6只大鼠以1.05 g/kg剂量的大叶白麻总黄酮灌胃给药，3 h后检测不到白麻苷，血药浓度-时间曲线如图4所示。 白麻苷在大鼠体内的代谢过程符合开放的二室模型：吸收速率常数Ka=0.47 min，表明白麻苷在胃肠道能很快的被吸收；灌胃后血浆中白麻苷在15 min即达峰值CMAX=0.53mg/L，且分布速率常数Kd=0.03 min，表明白麻苷进入大鼠体循环后，分布迅速；消除速率常数Ke=0.00 1 min，消除半衰期t=474.13 min，表明白麻苷在体循环中消除的很慢。见表4。

表4 大鼠灌胃给药后白麻苷的平均药代动力学参数

参数单位数值AUC(0-t)mg·min·L-163.10± 6.22AUC(0-∞)mg·min·L-1253.10±60.92MRTmin670.42± 206.80T1/2amin18.34± 9.63T1/2dmin32.85± 27.06T1/2emin474.13±143.64Tmaxmin15.00±7.75Cmaxmg·L-10.53±0.10Kamin-10.47±0.02Kdmin-10.03±0.02Kemin-10.001±0.001CLL·min-1·kg-14547.08±908.87VdmL·kg-12957954.15±238713.30AUMC(0-∞)mg·min·L-1179748.40±100513.70

4 结论

本实验建立了大鼠血浆中白麻苷的HPLC含量测定方法，方法专属性良好、简便易行，相对回收率、精密度、稳定性等均符合生物样品的分析要求。以1.05 g/kg剂量的大叶白麻总黄酮提取物灌胃大鼠，其主要成分——白麻苷在体内代谢过程符合开放二室模型，在体内能迅速分布发挥药效，同时持续时间较长。大叶白麻总黄酮的主要成分是白麻苷，并含有异槲皮苷、紫云英苷、芦丁及金丝桃苷。文献报道，大鼠灌胃罗布麻提取物后，血浆中可检测到金丝桃苷和异槲皮苷[15-16]。笔者在实验中尝试检测大鼠血浆中的金丝桃苷、异槲皮苷、芦丁、紫云英苷，但均未检测到化合物原型，而是出现了其他色谱峰，但是鉴于检测手段的局限性，无法确认代谢产物，这与文献报道有一定差异。一方面可能是由于这些黄酮成分代谢很快，在大鼠体内快速转化为其他成分，另一方面也可能与样品处理及方法检出限有关。