张云娟，刘洪明

（1.福建省浦城县动物卫生监督所，福建浦城 353400；2.烟台市农业综合执法支队，山东烟台 264000）

乳酸菌(Lactic acid bacteria)是指一类能发酵糖类产生乳酸的无芽胞、革兰染色阳性细菌的总称，是应用最早的一种益生菌，已被广泛添加于各种动物的饲料中。目前，市场上大部分乳酸杆菌菌株是从人和哺乳动物肠道中或土壤中分离到的[1]。由于乳酸菌的益生作用具有宿主特异性，即分离自同一动物肠道的菌类，一般只在本类动物肠道定殖发挥作用效果更好。为了寻找一种能够应用于猪的益生菌，本研究从猪小肠中分离猪源乳酸菌，并对分离的1株乳杆菌进行了详细的鉴定，为下一步乳酸菌益生效果的评价提供菌种来源。

1 材料与方法

1.1 实验样品

采取昆明某屠宰场猪消化道全套样品，无菌采取样品于无菌容器内，立即送检。

1.2 菌株的分离与初步鉴定筛选

将小肠样品去除粪便，无菌剪开用生理盐水冲洗，再用生理盐水将样品依次进行10，102，103，104，105，106稀释，取 1mL 稀释液倾注培养于加碳酸钙MRS培养基内，各稀释度倾注2个瓶皿，分别在37℃的恒温培养箱中厌氧培养48h。挑取单个有典型溶钙圈的菌落，MRS平板划线传代，纯培养[2]。

1.3 乳酸菌生理生化鉴定

根据革兰氏染色镜检，参照《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》[2]及《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版和第九版[3，4]，对该株乳酸菌进行以下生化鉴定实验。

1.4 乳酸菌16SrDNA基因测序及同源性分析

首先通过MRS液体培养基37℃厌氧培养至对数生长期，按照BIOTEKE公司细菌DNA提取试剂盒(DP2001)说明，提取乳酸菌的总DNA。……