陈广仁，王晓平，潘晓荣，袁 勇，李 岩

(甘肃省畜牧业产业管理局，甘肃 兰州 730030)

1 材料与方法

1.1 试验动物的饲养管理

6只雄性澳洲白绵羊，平均月龄21.4±4.1，平均体重80.2±2.5 kg。单栏饲养，自由饮水。早8点晚6点，定量投料，粗饲料含苜蓿30%、全株玉米青贮40%、大麦秸秆30%；精料含豆粕14%、菜粕8%、DDGS 12%、麸皮5%、玉米55%、种羊用预混料15%、食盐1%，总蛋白17.36%。在训练采精前15 d开始每天增加胡萝卜500 g/只，采精期间每羊每天补充2枚鸡蛋。利用假阴道法在有发情母羊的情况下训练采精。

1.2 公羊体重与阴囊周长的测定

训练公羊采精后，即采精实验期间，当天称重；同时利用皮卷尺在阴囊最大直径处测量阴囊周长，重复三次测量，取平均值。

1.3 精液采集与冷冻保存

采集精液后，将5微升精液于洁净载玻片上，显微镜下观察，精子密度≥20亿、精子活力≥70%，并且精子畸形率≤20%的精液才能够冷冻保存。先将每只羊的精液平均分为2份，分别用含大豆卵磷脂BioXcell和含卵黄Optidyl将精液进行两部分冷冻。

1.4 精液品质检测

1.4.1 精子活力检测

取出冷冻后的精子，于37℃水中 30 s。取 5 μL精液滴加于 Leja玻片腔室中，置于精液辅助分析仪下分析精液运动参数。

1.4.2 精子顶体完整率和DNA完整性分析

利用精子顶体染色试剂盒PSA-FITC进行精子顶体完整率检测，利用精子染色体扩散实验进行DNA完整性分析。

1.4.3 统计分析

对同一只公羊采精8次，对每一次的精液质量进行检测，取平均值；每只羊的精液冷冻实验至少3次，解冻后的常规质量和顶体完整率、DNA完整率等分析。采用 SPSS 21.0软件中的One-Way AVNOVA对结果进行差异显著性分析，分析结果用平均值±标准差表示。……