李文凯，李新敏，艾亮

郑州市妇幼保健院超声诊断科，郑州 4500120

乳腺癌是目前常见的一种女性恶性肿瘤，其发病率在女性恶性肿瘤中居首位，而且近年来由于女性面临压力的增加以及环境因素的改变等综合因素使乳腺癌的发病率有升高趋势[1-2]。如能在发病早期采取积极的治疗措施，能显著提高临床治疗效果，改善患者预后。目前，临床对乳腺癌的诊断方法较多，如超声影像、免疫组化、基因检测等，但由于各种主观因素的影响，其结果很难标准化[3-5]。肿瘤标志物是临床常用的早期筛查乳腺癌的重要手段之一，一种恶性肿瘤可以释放多种肿瘤标志物，而一种肿瘤标志物可以反映多种肿瘤。目前，科学研究发现，多种肿瘤标志物都与乳腺癌有关，但任何一种单独检测时的灵敏度均较低，尤其是对于早期患者非常容易漏诊[6-8]。此外，肿瘤标志物检测不能直观地反映病灶的大小、形态，对指导临床治疗意义较小。为此，本研究探讨彩色多普勒超声联合低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、STAT4激活蛋白抑制剂（protein inhibitor of activated STAT 4，PIASY）检测用于乳腺癌诊断的效能，为临床更加准确、及时地诊断乳腺癌提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年3月至2016年11月在郑州市妇幼保健院就诊的103例乳腺肿块患者作为研究组。纳入标准：有乳腺肿块；均在手术前采集血清标本且行超声检查。排除标准：合并其他恶性肿瘤、肝肾功能异常、妇科炎症、结核以及内科合并症者。研究组患者均为女性，年龄31～72岁，平均（42.3±3.2）岁；肿块直径7～104 mm，平均（48.2±11.2）mm；左侧病变59例，右侧病变42例，双侧病变2例。另选择同期在郑州市妇幼保健院进行健康体检的30例女性作为对照组，年龄30～71岁，平均（41.8±2.3）岁。两组研究对象的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院伦理委员会批准，入组研究对象及家属均对本研究知情同意，并签署知情同意书。

1.2 检查方法

1.2.1 多普勒超声检查 采用Sequia512型彩色多普勒超声诊断仪，探头频率为10～13 MHz。按常规检查方法先检查肿块的形态、大小、边界、位置、内方及后方回声、钙化情况、纵横比、与周边组织的关联、腋窝淋巴结是否肿大等二维超声特征。在此基础上，探测肿块内部及周围血流状况。血流状况选择最高流速处实行频谱检测，参数包括阻力指数（resistance index，RI）、搏动指数（pulsatility index，PI）、最大血流速度（maximum blood flow velocity，Vmax），共检测3次，取平均值。

1.2.2 肿瘤标志物检测 采用微创乳腺活检技术，通过免疫组化方法评估乳腺组织标本中HIF-1α和PIASY的表达情况。鼠抗人单克隆抗体购自上海麦莎公司，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色试剂盒购自南京建成公司。采集的标本经石蜡包埋，切片、染色，采用免疫组化方法进行检测，所有操作均根据说明书进行。

1.3 结果判定

1.3.1 多普勒超声诊断 恶性判断标准：①边缘呈毛刺状；②形态不规则；③内部回声不均匀；④后方回声减弱；⑤边界不清楚；⑥纵横比＞1；⑦存在腋下淋巴结肿大；⑧RI≥0.7。

1.3.2 肿瘤标志物诊断 HIF-1α主要定位于细胞核，PIASY主要定位于细胞膜、细胞核和细胞质。每张切片在光镜下随机选取10个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，根据阳性细胞所占比例及染色程度分别计分。按阳性细胞所占比例：无阳性细胞为0分，1%～10%为1分，11%～50%为2分，51%～80%为3分，＞80%为4分；按染色强度：基本不着色为0分，呈浅黄色为1分，呈棕黄色为2分，呈棕褐色为3分；阳性细胞所占比例评分与染色强度评分相乘后得出综合评分，综合评分＞4分为阳性表达[9]。

1.3.3 乳腺癌诊断 多普勒超声、HIF-1α及PIASY 3项诊断指标中有任何一项诊断为恶性或阳性则判定为乳腺癌，3项均为良性或阴性方可排除乳腺癌。诊断价值分析：以病理诊断结果为金标准，灵敏度=真阳性例数（/真阳性+假阴性）例数×100%，特异度=真阴性例数（/真阴性+假阳性）例数×100%，准确度=（真阴性+真阳性）例数（/真阳性+真阴性+假阳性+假阴性）例数×100%。Kappa值为诊断方法与金标准的一致性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0统-计软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理组织检查结果

103例乳腺肿块患者中，经病理组织检查确诊乳腺增生患者32例，良性肿瘤患者47例，乳腺癌患者24例。

2.2 HIF-1α、PIASY阳性表达情况的比较

研究组患者 HIF-1α、PIASY 阳性表达率均明显高于对照组健康人群，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 研究组患者与对照组健康人群HIF-1α、PIASY阳性表达情况的比较[n（%）]

2.3 彩色多普勒超声单独及联合肿瘤标志物诊断乳腺癌与病理诊断结果的对照

彩色多普勒超声诊断结果表明有41例乳腺癌患者，62例乳腺良性疾病患者；彩色多普勒超声联合HIF-1α、PIASY诊断结果表明有32例乳腺癌患者，71例乳腺良性疾病患者（表2）。彩色多普勒超声联合HIF-1α、PIASY对乳腺癌诊断的灵敏度、特异度、准确度及Kappa值均高于单独采用彩色多普勒超声（表3）。

表2 彩色多普勒超声单独及联合肿瘤标志物诊断乳腺癌与病理诊断结果的对照

表3 彩色多普勒超声单独及联合肿瘤标志物对乳腺癌的诊断价值

3 讨论

女性乳腺癌是目前威胁女性健康及生命安全的恶性肿瘤。近年来由于社会环境的剧烈改变，乳腺癌的发病率呈逐渐升高的趋势。对于多数肿瘤而言，在其发病早期进行确诊，采取积极有效的治疗措施，往往能够显著延长生存期，改善患者预后。因此，如何有效提高乳腺癌早期诊断的准确度已成为近年来的热点课题。越来越多的研究表明肿瘤标志物水平的升高通常会在患者表现出较为明显的临床症状之前的几个月出现，因此以肿瘤标志物作为肿瘤早期诊断的指标具有较高的研究价值[10]。但由于多种肿瘤均会导致肿瘤标志物水平的升高，使肿瘤标志物用于特定肿瘤诊断时的特异度较低。在此背景下，本研究旨在探讨彩色多普勒超声联合HIF-1α、PIASY检测用于乳腺癌诊断的灵敏度与准确度，为临床更早期诊断乳腺癌提供参考。

HIF-1α是一种肿瘤标志物，当细胞或组织内的氧含量下降时，会抑制机体对HIF-1α的降解，从而使其在细胞质内积聚，同时可发生核转位，并与β亚基结合形成二聚体，通过该二聚体激活目标基因的转录，发挥生物学活性[11-12]。研究分析表明其在良性肿瘤及正常组织中基本处于正常水平，而在恶性肿瘤组织中的表达水平显著升高[13]。PIASY是一种能够抑制信号转导及转录激活蛋白（signal transducer and activator of transcription，STAT）转录活性的蛋白质，在缺氧的环境下，其能通过抑制SIRT1基因转录而促进肿瘤的转移[14]。本研究结果也表明，研究组患者HIF-1α、PIASY阳性表达率均明显高于对照组健康人群，差异均有统计学意义（P＜0.01），与上述研究结果基本相符。

本研究103例乳腺肿块患者中，经病理组织检查确诊乳腺增生患者32例，良性肿瘤患者47例，乳腺癌患者24例。术前彩色多普勒超声诊断结果表明有41例乳腺癌患者，多普勒超声联合HIF-1α、PIASY诊断结果表明有32例乳腺癌患者。通过分析表明，彩色多普勒超声联合HIF-1α、PIASY对乳腺癌诊断的灵敏度、特异度及准确度分别为87.50%、86.08%和86.41%，均高于单独采用彩色多普勒超声，且与金标准具有更高的一致性。其原因可能是由于彩色多普勒超声能够清楚显示乳腺肿块的形态和组织结构，根据声像学特征对肿瘤的良恶性做出初步判断，而且能够显示肿块有无毛刺、锯齿样结构改变，边缘的光滑程度，实质内有无细小的钙化灶。而肿瘤标志物的检测具有较高的灵敏度，因此二者联合应用可显著提高对乳腺癌诊断的准确度、特异度以及灵敏度。

综上所述，彩色多普勒超声联合HIF-1α、PIASY检测对乳腺癌诊断的灵敏度与准确度均较高，具有较高的临床应用价值。