徐江昊 何建霄 文渚媛

【摘 要】

目的：研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞的凋亡及其机制。

背景：根据美国癌症研究协会2017年发布的年度癌症进展报告，我们发现癌症已经成为一个严重的全球性问题，癌症患者的数量正在增加。然而，传统的癌症治疗方法面临许多挑战，因此我们的实验试图研究有效的方法来解决癌症问题。

方法：采用MTT 法检测丁香酚对细胞活性的影响，采用Western blot法检测丁香酚对相关凋亡蛋白的影响，采用流式细胞术检测丁香酚是否促进了与癌相关成纤维细胞的凋亡。

结果：丁香酚对癌相关成纤维细胞（CAF）有抑制作用。

1.研究背景

癌症是世界范围内一个主要的公共卫生问题，也是导致大多数国家人口死亡率居高的主要原因。然而，传统的癌症治疗，包括手术、放疗和化疗，由于其副作用和高复发率，面临着严峻的挑战。因此，治疗恶性肿瘤迫切需要安全有效的治疗策略。

天然产物对药物开发很重要，许多天然物质的提取物，例如紫杉醇和MPSSS，都具有很强的抗肿瘤作用。丁香酚是从丁香中提取的精油主要成分，同时具有广泛的药理作用——参与免疫调节和抗炎反应。丁香酚很早就开始作为防腐剂、抗菌剂和止痛剂被使用。美国食品和药物管理局已经宣布丁香酚是安全的，并且是非致癌和非诱变的。近年来，有多项研究证明了丁香酚对各种癌细胞系和动物模型具有抗癌活性。

2.材料与方法

2.1材料

2.2方法

3.结果与分析

3.1 细胞毒性试验检验丁香酚对细胞活力的影响

（1）用不同物质的量浓度的丁香酚处理正常成纤维细胞（NF），24 小时后，用MTT 法检测细胞活力。

（2）用相同物质的量浓度梯度的丁香酚处理癌相关成纤维细胞（CAF），24小时后，用MTT 法检测细胞活力。

如图3所示，数据表明，在0到1.2mM 浓度范围内，丁香酚对正常成纤维细胞活力没有显著性影响；而癌症成纤维细胞随浓度增加活性显著降低，这说明丁香酚对肿瘤微环境中的成纤维细胞有选择毒性。

結果表明，随着丁香酚浓度的升高，癌相关成纤维细胞活力显著下降。

3.2 流式细胞术——丁香酚促进相关成纤维细胞凋亡

结果显示（图4、图5），随着丁香酚浓度升高，Annexin V 阳性（三、四象限）和早期凋亡（第四象限）细胞的比例不断增大。

3.3.Western Blot——丁香酚对凋亡相关蛋白表达水平的影响

使用特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色的深度，可以得知特定蛋白质表达水平量。

（一）Bax 促进肿瘤凋亡作用。

（二）BCL-2 （B-cell lymphoma-2） 是细胞凋亡中最受重视的癌基因之一。

（三）GAPDH 不受药物处理的影响，作为内参蛋白，即参照物。

如图6，结果显示，在0.6mM 情况下，随着时间的推移，Bax 增值，BCL-2 显著减少，GAPDH 几乎没有变化。

结论：初步说明丁香酚对癌症相关成纤维细胞有抑制作用。