任南洁，赵路，袁志明，夏菡

中国科学院 武汉病毒研究所，湖北 武汉430071

CCHFV的基因组结构和其他布尼亚病毒类似，由3节段负链RNA组成，分别是小片段（S）、中片段（M）、大片段（L），它们分别编码病毒的核衣壳蛋白（nucleocapsid protein，NP）、糖蛋白前体（glycoprotein precursor，GPC）和病毒RNA 依赖的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）[5]。每个基因组片段中都包含1个开放读框（open reading frame，ORF），ORF的两端为非翻译区（untranslated region，UTR）。其中，L片段的基因组最大（～12 kb），远大于布尼亚病毒目中其他病毒的L片段，其编码的RdRp 由4000 多个氨基酸残基组成，相对分子质量约为450×103。除RdRp的活性外，L片段编码的蛋白还含有1个OTU（ovarian tumor，卵巢肿瘤）结构域，可能与病毒逃逸宿主的先天免疫有关。M片段约为5.4 kb，其转录翻译首先合成糖蛋白前体，然后在宿主来源的多种蛋白酶的作用下，剪切加工为病毒包膜上的糖蛋白GN和GC，以及非结构蛋白mucin、GP38、NSM的前体[6]。GN和GC含有中和抗原决定簇，在病毒吸附和侵入宿主细胞的过程中起重要作用，能诱导中和抗体产生[7]，而具有这种免疫原性的M片段的快速突变和频繁重排已有报道[8]。S片段大小为1.6 kb，编码NP 蛋白和1个非结构蛋白（nonstructural proteins，NSs），NP 蛋白可以将病毒RNA和cDNA 包装为核糖核蛋白颗粒（ribo⁃nucleoprotein particles，RNPs），并与病毒mRNA的5'UTR 以高亲和力结合，然后促进mRNA 翻译[9]。

CCHFV基因组的S、M和L片段ORF 两端的UTRs 足以用于病毒小基因组RNA的转录、复制和包装[10]。UTRs 由可变区和高度保守的末端区域组成，末端保守的核苷酸能互补形成非共价闭合的二级结构，与病毒聚合酶进行相互作用。

反向遗传学技术是以生物基因为主要研究对象，基于对基因核苷酸序列的人为操作，探索基因调控的分子机制以及生命发生发展的本质现象和规律等[11]。……