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沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

2019-02-28田赛郭卫光包仁龙向莹张浩然杨超杰谢靖刘鸿博宋宏彬邱少富杜昕颖

生物技术通讯 2019年6期
关键词:检测方法

田赛,郭卫光,包仁龙,向莹,张浩然,杨超杰,谢靖,刘鸿博,宋宏彬,邱少富,杜昕颖

中国人民解放军疾病预防控制中心,北京100071

沙门菌是一种革兰阴性菌,属肠杆菌科,是常见的食源性肠道致病菌[1]。食用受污染的生肉、家禽、蛋类、乳制品等可使人发生食物中毒,由致病性沙门菌引起的人类疾病通常被称为沙门菌病[2]。沙门菌病对全球特别是发展中国家的公共卫生构成严重威胁,在中国沙门菌病占食源性疾病的40%~60%[3]。因此,快速、准确地检测沙门菌对沙门菌病的有效防治是十分必要的。沙门菌鉴定的传统方法主要根据形态学特征、培养特征、生理生化特征、抗原特征、噬菌体特征等。细菌培养是鉴定肠道致病菌的金标准,但这一过程耗时较长,需3~5 d[4-5]。基于抗原和噬菌体检测法只能针对活细菌,敏感性较低,容易出现假阴性情况,特异性差[6]。与传统方法相比,基于核酸特异性序列分子方法的实时荧光定量PCR 具有快速、敏感、特异且稳定的优点。我们根据沙门菌特异的外膜孔蛋白F基因(ompF)[7]的特异性序列设计合成引物及TaqMan 探针,建立了可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR 法。

1 材料与方法

1.1 材料

甲型副伤寒沙门菌,乙型副伤寒沙门菌,丙型副伤寒沙门菌,猪霍乱沙门菌,鼠伤寒沙门菌,肠炎沙门菌,旺兹沃思沙门菌,亚利桑纳沙门菌,汤卜逊沙门菌,痢疾志贺菌,弗氏志贺菌,宋内志贺菌,鲍氏志贺菌,副溶血弧菌,霍乱弧菌,大肠埃希菌EAEC、EPEC、ETEC、STEC,均为解放军疾病预防控制中心实验室保存。……

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