石 楠

（朝阳市中心血站检验科，辽宁 朝阳 122000）

ELISA法的优势是便捷操作、高灵敏度与特异性，可以检测各类抗原与抗体，它是普适的固相免疫检测法[1]。艾滋病正呈不断蔓延的态势，就更加应当重视艾滋病检测的准确度。本次实验选择2016年12月至2018年12月3860例患者作为本次实验的研究对象，实验研究结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2016年12月至2018年12月3860例患者作为本次实验的研究对象,所有患者接受常规检查与抽血检查,进行抽血检查时，务必严格遵照安全防护制度与临床采血技术要求，并按照试剂盒说明书规定，实施血液样本采集。所有患者的静脉血采集量为3～5 mL。

1.2 试剂与设备。试剂：试剂经国家食品药品监督管理局批准，批检合格，全部处在有效期内。运输与贮存试剂时，应保持在2～8 ℃环境中，忌在常温下存放试剂过长时间，试剂尽量不要多次冻融或受热，否则致酶失活，运用当中应当密闭保存防止受潮。实验开始前，把试剂放到室温下大约0.5 h，让试剂与室温趋于一致，从而以最快速度达到实验标准。仪器：全自动酶免分析仪。

表1 不同年龄组HIV抗体检测情况

1.3 检测方法：如果无法立刻检测标本，把在5 d内检测的血清标本保存在4 ℃的环境中，把1周后检测的血清标本保存在低温的环境中。严格遵照试剂使用说明书、检测规程，对血清标本进行检测，避免交叉污染。数次检测，处理检测结果，建立质控图。经过检测，结果呈阴性，出具HIV抗体阴性报告。检测结果呈阳性，将阳性人员送至省疾控中心，以待进一步确认。

1.4 统计学处理：此次实验所有数据全部由SPSS21.0版统计软件进行处理，计量资料采用±标准差（）表示，采用t检验进行组间数据对比；以率（%）表示计数资料，采用卡方检验比较组间资料。以P＜0.05代表差异有统计学意义。

2 结果

检测3860例患者HIV抗体，10例确认为阳性，阳性率为0.26%。10例阳性确诊病例中，男性7例，女性3例，年龄20～46岁，见表1。

3 讨论

3.1 ELISA法：ELISA法就是酶联免疫吸附测定法，经免疫酶技术演化而来的特殊试剂分析法，检测当中，注入特殊的酶底物，经酶的催化或水解，无色的底物就会呈现出颜色；因而，通过肉眼或依靠分光光度计，即可观测检测结果[2]。

3.2 ELISA法检测HIV抗体的影响因素

3.2.1 样本因素。运用酶联免疫吸附测定法进行检测时，HIV病毒抗体标本自身的质量会对检测产生重大影响。临床医学常规血检标本就是通常的血清，检验血清时，需要彻底分离，摄入纤维蛋白会产生一定的反应孔。出现上述情况的原因在于纤维蛋白本身有着吸附功效，检测时难以清除干净，从而检测结果的准确性受到一定影响；其次，在冷冻保存血清样本时，切忌反复冷处理血清样本，因为每进行一次冷处理都会破坏血清蛋白分子；与此同时，催化处理溶血标本中产生的红血蛋白，以防止二次洗板当中，残留存活的蛋白给检测结果的正确反应带去影响[3]。

3.2.2 加样因素。运用ELISA法检测HIV抗体时，加样的操作人员会直接影响检测质量，因此，务必重视控制此过程的质量。通常选择移液器进行加样，定时校准移液器，操作人员应当对加样时间加以控制，保证在短期内完成，但是若加样量过大，就应当分批次操作，并掌握好每批次间的实施时间，防止产生相互干扰现象。加样时，提前摇匀滴瓶，接着进行预吸，在挤出第1滴后，再增加滴数，旨在避免产生气泡。严格把握滴入量，以保证酶标板孔底部的滴入量达到要求，防止接触孔壁的边缘，也就是操作人员选择垂直加样的方法，可以较好防止加样对检测结果准确度所带去的影响[4]。

3.2.3 温度控制因素。相关实践研究证明，ELISA法检测HIV抗体时，温度成为致检测结果呈现假阳性或假阴性的主要因素，所以操作人员一定要对温度进行严格控制。首先，应当关注冰箱温度与实际温度的不同，在冰箱中放入温度计，以监测样本与试剂盒所处环境的温度情况，并记录相关情况。把样本与试剂盒从冰箱内取出后，需将其于室温中放置一段时间，当样本与试剂盒的温度与室温达到一致后，再行开始操作。没有用完的试剂，依旧密闭保存，并清楚标注其实际情况。在操作开始之前，调整室温温度到20～25 ℃。温度会影响抗原、抗体结合，显色深度会随着温度的上升而加深，所以应当控制显色过程中的温度。比如：把辣根过氧化物酶（HRP）当作标记酶物，一般底物是3，3～5，5～-四甲基联苯胺（TMB），务必温度要控制在（37±1）℃，且此温度要保持30 min，方可产生催化反应。另外，如果希望弱阳性标本孔可以充分显色，务必要把温度控制在37 ℃以下，且维持30 min后终止反应，防止时间过长，影响绘制质控图。

3.2.4 洗板因素。如果进行机洗，就要注意清洁与维护仪器，适时检测，保证洗板质量。使用后，务必使用蒸馏水冲洗管道，一方面清洁管道，另一方面防止污染环境[5]。洗板过程中，防止混用洗涤液，以免不同试剂采用对应洗涤液。通常清洗洗板次数为5～6次，清洗时间需控制在60 s以内，从而可以防止假阳性应对浸泡板子。

3.2.5 比色因素。进行比色时，挑选双波长。微孔板与孔内标本具有非特异性吸收、灰尘的功能，会对吸光度产生一定影响，双波长就能较好防止此种影响[6]。

3.2.6 读板因素。在读板过程中，打开酶标仪，至少预热20 min，接着方可测定样本吸光度，且须控制在15 min内读完。

HIV病毒是艾滋病的主要诱发因素，所以临床十分重视监测HIV病毒。伴随医疗技术的进步，目前临床检测HIV病毒方法有了长足发展，这其中被广泛应用且有着颇高价值的检测方法就是酶联免疫吸附剂测定法（ELISA），ELISA可以检测HIV抗体，从而让诊断、监测艾滋病的功效大大提升。

酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）是一种特异性基因工程检测技术，是检测HIV较为理想的手段。ELISA法检测操作便捷，成本不高，有着很高的特异性与灵敏度，同时可以实现自动化操作，十分有利于把控实验室检测质量，检测结果准确度高，其检测结果数据也利于保存，正是因为有着上述这些优势，ELISA法被广泛运用到医院大批量体检、筛查血站献血人员、中型医院检测科早期检测HIV抗体，从而减少假阳性率，降低医患纠纷的概率[7]。与此同时，其他比如：监测艾滋病流行病学，检测特定人群HIV感染情况与发展趋势，针对流行病学、临床、病毒学或HIV相关研究对象开展自愿检测等，应当挑选具有高特异性的ELISA试剂。

综上所述，运用ELISA法检测HIV抗体时，应当分析影响ELISA法检测抗体结果的因素，挑选优质试剂，确保检测操作规范，从而保证最后检测结果的准确度，让真阳性率能够进一步提高。