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(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523808)

氯苯那敏又称扑尔敏，属于第一代组胺H1受体拮抗剂，为常用的抗过敏药物，广泛用于治疗各种皮肤过敏症、过敏性鼻炎、药物及食物过敏等。氯苯那敏具有明显的中枢抑制作用，可引发交叉过敏，引起嗜睡困倦、口渴心悸、皮肤瘀斑、出血倾向以及肝损伤等[1-4]。

目前市场上存在许多种抗过敏类健康产品，大多宣称其成分主要为纯天然成分，不含西药。不法分子利用中成药和保健食品成分复杂的特点，非法添加氯苯那敏[5-9]，夸大宣传功效，给人民群众的身体健康带来严重威胁。

本研究建立了一种简单快速的化学显色反应方法，可用于抗过敏类健康产品中是否非法添加氯苯那敏的快速筛查。此外，本研究还建立了高效液相色谱串联质谱法，用于快筛结果的确证。

1 仪器与试药

AB SCIEX3200QTRAP液质联用仪；赛多利斯BP211D电子天平；马来酸氯苯那敏对照品(中国食品药品检定研究院，批号100047-200606，含量99.7%)；甲醇、乙酸及乙酸铵均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为化学纯。抗过敏类健康产品为市购滴鼻剂(共31批)。

2 方法与结果

2.1 化学显色反应快筛方法

2.2.1 取样 结合收集的样品及市面流通的此类健康产品的实际情况，推荐取样量如表1所示。

表1 各剂型推荐取样量

注：如为固体样，需研细。

2.1.2 供试品处理 取供试品1mL放入装有5mL水的A瓶中，闭塞，振摇1min，静置后吸取水溶液1mL，加入装有2mL醋酸-醋酸钠缓冲盐溶液(pH=3.6)的B瓶中，振摇后加入1mg/mL的钙紫红色素溶液1mL，摇匀，再加入3mL二氯甲烷，振摇，静置分层。

2.1.3 结果判断 观察二氯甲烷层(下层)颜色，如显粉红至红色，表明供试品含氯苯那敏；如颜色无变化，则不含氯苯那敏。

2.2 方法验证

2.2.1 专属性试验 分别取马来酸氯苯那敏对照品及阴性样品感冒退热颗粒(批号：MC003，生产厂家：广东益和堂制药有限公司)适量，按“2.1.2”项方法，观察二氯甲烷层的颜色。结果：阳性对照溶液管中的二氯甲烷层显红色，阴性对照溶液管中二氯甲烷层为无色，表明该反应专属性良好。

2.2.2 灵敏度试验 取马来酸氯苯那敏对照品适量加水溶解，稀释制成0.001mg/mL～0.5mg/mL灵敏度检测溶液，按“2.1.2”项方法，分别加入不同浓度的灵敏度检测溶液，结果显示方法的最低检出限为0.005mg/mL。

2.3 高效液相色谱串联质谱法

2.3.1 色谱条件 色谱柱：CAPCELL PAK C18MG III 5μm，2.0×150mm；流动相：以0.4%乙酸-0.04%乙酸铵缓冲溶液-甲醇(45∶55)，流速：0.2mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃。

2.3.2 质谱条件 ESI电离源；正离子模式；多反应监测(MRM)扫描方式；喷雾电压：5 500V；气帘气压力：25psi；雾化气压力：40psi；辅助加热器温度：400℃；辅助气压力：40psi；碰撞气压力：Medium；碰撞室出口电压：3 V，解簇电压(DP)及碰撞能量(CE)。见表2。

表2 马来酸氯苯那敏对照品的质谱条件优化结果

2.3.3 对照品溶液的制备 精密称定马来酸氯苯那敏对照品约10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液1mL置100mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.3.4 供试品溶液的制备 称密量取1mL供试品溶液置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1mL置100mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.2μm滤膜，取续滤液即得。

2.3.5 样品测定 取对照品溶液及供试品溶液各10μL注入液质联用仪，按照LC-MS/MS测定条件分别进行分析，按下表3判定，5批样品中确证非法添加氯苯那敏。典型图谱见图1-图2。

表3 定性离子对相对丰度的最大允许相对误差 (%)

图1 氯苯那敏对照品的质量色谱及离子对

图2 样品(B-24)中的氯苯那敏的质量色谱及离子对

3 结果评价

应用本方法筛查31批市售抗过敏类样品，结果有5批检出非法添加氯苯那敏，并经高效液相色谱串联质谱法确证。本方法筛查的灵敏度为100%，漏检率为0，正确率为100%。

4 讨论

4.1 快筛前处理方法研究

本研究对快筛前处理曾考察过多种化学鉴别方法：①针对马来酸的不饱和双键，利用其还原性可使酸性高锰酸钾试液褪色；②针对氯苯那敏结构的吡啶环含第三氮原子，呈碱性，可与重金属盐类(如氯化汞、硫酸铜、碘化铋钾等)及苦味酸等沉淀剂发生沉淀反应等；③针对氯苯那敏侧链上的叔胺结构，可与枸橼酸醋酐试液加热后反应显紫红色等。但以上方法专属性不强，且使用毒害试剂或需增加辅助加热仪器等，均不适用于开发现场快速筛查方法。本快筛方法通过向待测样品中加入特定pH值的缓冲盐溶液，使氯苯那敏单元中侧链叔胺结构带电，从而与显色剂钙紫红色素发生络合反应，生成非极性的有色络合物，经二氯甲烷萃取后，使二氯甲烷层溶液变色。此方法简便快捷灵敏，无需使用额外辅助设备。

4.2 检出限

马来酸氯苯那敏单次常用口服剂量为4mg，本化学快筛方法检出氯苯那敏的单次最少检出量仅为0.03mg，简单灵敏，可广泛应用于抗过敏类健康产品中非法添加氯苯那敏的快速筛查。

在高效液相色谱串联质谱方法中，取不同浓度的对照品溶液进样，记录质量色谱图并计算信噪比S/N值，至S/N≈3为检出限，结果该法检出限为0.01ng，满足确证方法要求。

5 结语

本实验建立了抗过敏类健康产品中非法添加氯苯那敏的化学反应快筛方法，共计对31批样品进行测定，经高效液相色谱质谱联用方法确证有5批样品非法添加马来酸氯苯那敏。本实验方法专属性强、灵敏度高、结果准确，可广泛应用于抗过敏类健康产品中非法添加氯苯那敏的快速筛查。